AngⅡ、醛固酮致心肌纖維化及Wnt1在其中的作用.pdf

1、目的：探討大鼠心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts, CFs)經(jīng)血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮及其受體拮抗劑干預(yù)后CFs細(xì)胞活性的改變以及對細(xì)胞中致心肌纖維化相關(guān)基因表達(dá)的影響,同時深入研究Wnt1基因在該過程中的作用,為預(yù)防和控制心肌纖維化提供新的理論依據(jù)。
　　方法：采用膠原酶II消化法、差速貼壁法提取純化CFs,在AngⅡ、醛固酮及其受體拮抗劑作用下,應(yīng)用Cell Countin

2、g Kit-8(CCK-8)活細(xì)胞計數(shù)試劑盒檢測成纖維細(xì)胞活性,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測細(xì)胞中靶基因及相關(guān)基因mRNA表達(dá)的變化, Western blot方法檢測細(xì)胞中靶基因及相關(guān)基因蛋白表達(dá)的變化。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預(yù)的心肌成纖維細(xì)胞,應(yīng)用 RNAi技術(shù)敲低 Wnt1基因表達(dá)后,分別應(yīng)用CCK-8、RT-PCR、We

3、stern blot方法檢測細(xì)胞活性、靶基因及相關(guān)基因表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：與對照組比較,AngⅡ、醛固酮獨(dú)立干預(yù)可明顯促進(jìn) CFs細(xì)胞活性增加,AngⅡ、醛固酮聯(lián)合干預(yù)的細(xì)胞增殖活性較 AngⅡ、醛固酮單獨(dú)干預(yù)更高,且AngⅡ、醛固酮的受體拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖效應(yīng);與對照組比較,AngⅡ、醛固酮可顯著促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞I型膠原前膠原A1(collagen, type I, alpha1,

4、Col1a1)、III型膠原前膠原A1(collagen, type III, alpha1,Col3a1)、基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrix metalloproteinase1,MMP1) mRNA和蛋白表達(dá),同時抑制基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(tissue inhibitors of the factor matrix metalloproteinase1,TIMP1) mRNA和蛋白表達(dá);和醛固酮組比較,AngⅡ組在促進(jìn)心肌成纖

5、維細(xì)胞Col1a1、Col3a1、MMP1基因表達(dá)增加和TIMP1減低方面作用更強(qiáng);氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導(dǎo)的Col1a1、Col3a1、MMP1 mRNA和蛋白表達(dá)的增加,同時升高TIMP1 mRNA和蛋白表達(dá)。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預(yù)的心肌成纖維細(xì)胞,利用Wnt1-siRNA敲低Wnt1基因后,細(xì)胞增殖活性明顯降低,靶基因Wnt1及膠原基因Col1a1、Col3a1表達(dá)均相應(yīng)減低。
　　結(jié)論：AngⅡ、醛固酮

6、可促進(jìn)體外培養(yǎng)大鼠CFs細(xì)胞數(shù)量增殖和增加細(xì)胞內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá),AngⅡ、醛固酮同時干預(yù)時具有協(xié)同和疊加效應(yīng),且 AngⅡ在促進(jìn)心肌膠原表達(dá)方面較醛固酮更強(qiáng);而它們的拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可抑制這些效應(yīng),其作用機(jī)制可能通過影響MMPs/TIMPs的平衡,使心臟膠原合成與分解代謝紊亂,增加CFs細(xì)胞增殖活性,促進(jìn)心臟纖維化,而氯沙坦、螺內(nèi)酯可通過抑制CFs細(xì)胞增殖和膠原表達(dá)抑制心肌纖維化。體外培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1-siRNA后