杜氏鹽藻鈣依賴蛋白激酶CDPK基因的克隆、表達載體的構(gòu)建及對擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、鈣依賴蛋白激酶(CDPK)是植物和一些原生生物所特有的一類絲氨酸/蘇氨酸型的蛋白激酶，參與環(huán)境脅迫信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)是CDPK的重要作用之一。在干旱、寒冷和低滲透等多種因子的作用下都引起CDPK基因的特異性表達和mRNA的特異積累。杜氏鹽藻是一種真核單細胞綠藻，可以在0.1～5.5mol/L的NaCl溶液中生長，是研究藻類植物耐鹽機制的較好模型。杜氏鹽藻之所以能耐受鹽脅迫與其細胞中CDPK基因的存在有關(guān)。為了從基因水平上研究其耐鹽機制，本實驗利

2、用同源克隆的方法成功克隆到杜氏鹽藻CDPK基因并將其轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中，這將為下一步功能研究以及與耐鹽相關(guān)的植物滲透脅迫誘導(dǎo)基因的克隆奠定了實驗基礎(chǔ)，同時也為培育高效耐鹽植物以及緩解土壤鹽漬化問題的解決奠定了基礎(chǔ)。本實驗研究的內(nèi)容主要包括以下四個方面： 1.利用同源克隆的技術(shù)從杜氏鹽藻中順利克隆到一條636bp的DNA片段，測序分析發(fā)現(xiàn)其同擬南芥的CDPK基因有60.3﹪的同源性，然后以該片段為基礎(chǔ)，利用RACE技術(shù)構(gòu)建了全長

3、序列。 2.植物表達載體pBI121-CDPK的構(gòu)建與鑒定：利用DNA重組技術(shù)，將杜氏鹽藻CDPK基因克隆至植物表達載體pBI121中，通過酶切、電泳鑒定CDPK基因已成功構(gòu)建到植物表達載體pBI121中；然后將重組質(zhì)粒pBI121-CDPK通過凍融法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105中，Kan平板篩選陽性克隆，有單菌落生長，證明重組質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105中。 3.花序浸泡法轉(zhuǎn)化擬南芥：生長于花盆中的擬南芥植株，其花序