蛋氨酸腦啡肽(MEK)抗B型流感病毒感染作用的研究.pdf

1、流行性感冒是由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道傳染病，是對(duì)人類(lèi)健康威脅最大的傳染病之一。其發(fā)病率居傳染病首位。迄今為止最有效的防治流感病毒的手段是接種流感疫苗。目前尚缺乏可靠的方法對(duì)流感發(fā)生與流行的周期性進(jìn)行有效預(yù)測(cè)，這給流感疫苗的生產(chǎn)帶來(lái)困難。因此抗流感病毒物質(zhì)的研究，是目前各國(guó)研究的重點(diǎn)。蛋氨酸腦啡肽(Methionine Enkephalin，MEK)是哺乳動(dòng)物體內(nèi)自然生成的，由腎上腺產(chǎn)生的前激素和前腦啡肽衍生而來(lái)。已有研究表明人體

2、內(nèi)免疫細(xì)胞廣泛存在MEK受體，適宜濃度MEK能通過(guò)與受體作用顯著提高機(jī)體免疫功能。MEK在流感病毒感染的小鼠中能顯著增加體液免疫和細(xì)胞免疫功能，MEK與其它抗病毒藥合用能治療病毒性肺炎，顯著延長(zhǎng)受感染動(dòng)物的生存期。MEK可以推遲HIV感染者病程，減輕癥狀，增加體內(nèi)的CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量，CTL細(xì)胞的活性，增加IL-2、干擾素等細(xì)胞因子的產(chǎn)生。有人把它稱(chēng)作治療性疫苗。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)探討MEK抗B型流感病毒感染的作用，為MEK作為預(yù)

3、防流感疫苗的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 1、主要試劑及藥品：MEK：批號(hào)：63231，分子量：574，美國(guó)Penta-biotech。
　　 2、B型流感病毒液(滴度為1：64)，由遼寧省CDC保存并傳代毒株。
　　 3、雞胚：8-11日齡雞蛋由遼寧省朝陽(yáng)北票種雞廠提供。
　　 4、狗腎細(xì)胞系(Medin-Darby canine kidney，MDC

4、K)細(xì)胞：孵育培養(yǎng)24小時(shí)的第17-18代MDCK單層細(xì)胞由遼寧省CDC傳代細(xì)胞系。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　 試驗(yàn)分組：MEK設(shè)10-5，10-6，10-7，10-8，10-9，10-10，10-11，10-12，10-13，10-14mol/L等濃度組，每組設(shè)4孔平行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和病毒對(duì)照。空白對(duì)照組：加入200ul病毒維持液。病毒對(duì)照組：加入100

5、TCID50流感病毒和病毒維持液各100ul，其余各組按不同的先后次序分別加入MEK和100TCID50 B型流感病毒各100ul，在34℃5％CO2孵育72小時(shí)后觀察細(xì)胞病變，置于-70℃凍融后做血凝實(shí)驗(yàn)。
　　 2、MEK抗B型流感病毒感染雞胚實(shí)驗(yàn)
　　 試驗(yàn)分組：根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)MEK10-12mol/L，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和病毒對(duì)照?？瞻讓?duì)照組加入200ul生理鹽水，病毒對(duì)照加入100EID50流感病毒和生理鹽水各100

6、ul，10-12mol/LMEK組按不同的先后次序分別加MEK和100EID50 B型流感病毒各100ul，在34℃孵育72小時(shí)，置于-20℃1小時(shí)取尿囊液做血凝實(shí)驗(yàn)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　 空白對(duì)照組無(wú)細(xì)胞病變，無(wú)血凝。病毒對(duì)照和其他組均出現(xiàn)細(xì)胞病變，病毒滴度為1：64。
　　 2、MEK抗B型流感病毒感染雞胚實(shí)驗(yàn)
　　 空白對(duì)照組無(wú)血凝；病

7、毒對(duì)照組HA滴度為1：64；先注射10-12 Mol/L MEK溫育24小時(shí)后再注入B型流感病毒組，HA滴度為6.8±1.93與病毒對(duì)照組比較P<0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 討論：
　　 MEK是參與神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)。研究證明T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞(NK)等均含有MEK受體，適宜濃度的MEK與受體結(jié)合具有激活免疫細(xì)胞作用，特別是增加T淋巴細(xì)胞活性。
　　 通過(guò)MEK抗B型

8、流感病毒感染實(shí)驗(yàn)，未見(jiàn)MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK細(xì)胞株的作用但可見(jiàn)MEK抗B型流感病毒感染雞胚的作用，表明了MEK可能通過(guò)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)增加干擾素，白介素等多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，這些因子在病毒復(fù)制周期中的一個(gè)或多個(gè)環(huán)節(jié)，作用于靶細(xì)胞，通過(guò)阻滯病毒復(fù)制，或通過(guò)誘導(dǎo)一系列抗病毒蛋白質(zhì)干擾其復(fù)制，或抑制病毒生活周期中的某些關(guān)鍵成分，增強(qiáng)機(jī)體的抗病毒的能力，具體機(jī)制正在進(jìn)一步深入研究之中。本研究為MEK.將來(lái)作為人類(lèi)非特導(dǎo)性保護(hù)性疫苗，提