腺病毒介導(dǎo)NK4基因和B7-1基因共表達(dá)治療胰腺癌的體外研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)NK4基因和B7-1基因共表達(dá)治療胰腺癌的體外研究姓名：吳坤松申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：彭和平20090520廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 腺病毒介導(dǎo)N K 4 基岡和B 7 ．1 基岡共表達(dá)治療胰腺癌的體外研究癌細(xì)胞中N K 4 基因和B 7 ．1 基因的m R N A 水平，W e s t e r nB l o t 檢狽J J B 7 ．1 蛋白的表達(dá)；4 ．M T T 觀察A d ．N K

2、4 一B 7 ．1 感染在體外對(duì)S W i 9 9 0 生長(zhǎng)的影響，并檢測(cè)N K 4 ．B 7 ．1 重組腺病毒體的細(xì)胞克隆表達(dá)產(chǎn)物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果該病毒能有效感染H E K 2 9 3 細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)成功增殖，通過不同M O I 的A d ．G F P腺病毒感染，發(fā)現(xiàn)在M O I d x 于8 0e f u ／m l 時(shí)，感染效率隨病毒滴度的增加而提高。當(dāng)M O I 為6 0 e f u ／m l 時(shí)，S W l 9 9

3、 0 細(xì)胞的感染效率接近1 0 0 ％。以病毒感染2 4 d x 時(shí)N K 4 ．B 7 ．1基因表達(dá)水平為1 0 0 ％，B 7 ．1 及N K 4 都在第5 天達(dá)到最高水平的表達(dá)，隨后開始下降，第九天的表達(dá)水平只有2 4 d x 時(shí)表達(dá)量的1 ．5 倍左右。到1 2 天時(shí)兩個(gè)基因的表達(dá)水平都只剩+ [ “ 2 4 d x 時(shí)表達(dá)量的約1 ／4 。W e s t e r n ．b l o t 法檢測(cè)到A d - N K 4 ．B 7

4、．1 感染能明顯增強(qiáng)B 7 ．1 的表達(dá)；A d - N K 4 ．B 7 ．1 感染對(duì)S W l 9 9 0 的生長(zhǎng)無明顯改變．病毒感染上清液可顯著抑H G F 誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的牛長(zhǎng)。結(jié)論1 ．腺病毒介導(dǎo)能有效地感染S W l 9 9 0 細(xì)胞并表達(dá)高水平的N K 4 和B 7 ．1 基因；2 ．腺病毒感染及A d - N K 4 ．B 7 ．1 的表達(dá)在體外對(duì)S W l 9 9 0 生長(zhǎng)無明顯影響；3 ．A d - N K 4