消癓軟肝方對(duì)肝硬化大鼠肝組織MMP-1及TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察消癓軟肝方對(duì)肝硬化大鼠血清天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、白蛋白(Alb)、總蛋白(TP)含量和肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表達(dá)變化以及肝組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響，探討本方治療肝硬化的作用機(jī)制。
　　 方法：選取健康Wistar大鼠60只，雄性，正常喂養(yǎng)1周后，平均分為5組，每組12只。即：正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱正常組)、模型

2、對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)、陽(yáng)性藥對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)、消癓軟肝方高劑量組(簡(jiǎn)稱高劑量組)和消癓軟肝方低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組)。除正常組外，其余各組動(dòng)物首次皮下注射40％CCL4花生油溶液0.5ml/100g體重，以后每周2次皮下注射0.3ml/100g體重，并以30％乙醇作為飲料，以高脂飼料喂養(yǎng)。正常組則以正常飼料和純凈水喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)9周末確定肝硬化形成后，高、低劑量組分別灌服消瘤軟肝方藥液，用藥劑量分別為2.6g/kg、1.3g/kg，陽(yáng)性

3、藥對(duì)照組灌服復(fù)方鱉甲軟肝方混懸液，用藥劑量為1.2g/kg，正常組和模型組灌服等量蒸餾水，均為每日一次。治療4周后，于最后一次給藥禁食12h后麻醉狀態(tài)下，股動(dòng)脈取血，將血樣低溫離心，分離血清，測(cè)定血清ALT、AST、TP、Alb的含量；同時(shí)迅速剖取動(dòng)物肝臟，在肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取0.5cm×0.5cm大小肝組織，4％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，運(yùn)用HE染色光鏡下觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)變化，并用免疫組織化學(xué)方法觀察MMP-1

4、及TIMP-1的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、消癓軟肝方對(duì)肝硬化大鼠血清ALT、AST、Alb、TP的影響模型組大鼠血清ALT(110.36±8.81)、AST(122.15±12.33)含量較正常組(22.19±2.12，60.34±7.86)明顯升高(P<0.01)，Alb(27.19±3.18)、TP(59.08±5.92)含量較正常組(36.84±3.66，67.86±7.11)明顯降低(P<0.05)。給

5、藥治療后，各治療組血清ALT、AST含量均低于模型組(P<0.01)，TP、Alb含量均高于模型組(P<0.01)。其中高劑量組和對(duì)照組ALT(13.14±1.55)(12.81±1.54)以及AST(52.98±4.68)、(47.31±5.38)的含量均低于低劑量組(24.55±3.81，61.63±7.52)(P<0.05或P<0.01)；而高、低劑量組和對(duì)照組ALT與AST的含量以及高劑量組、低劑量組與對(duì)照組之間Alb(33.8

6、3±4.21，31.96±3.43，33.62±2.65)、TP(67.04±7.72，67.79±5.18，68.81±6.77)的含量，組間比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 2、消癓軟肝方對(duì)肝硬化大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響
　　 正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列規(guī)則成索狀，在中央靜脈周圍呈放射狀分布。肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)異常改變。肝細(xì)胞呈多邊形，胞漿均勻，細(xì)胞核形態(tài)正常。模

7、型組大鼠肝小葉正常結(jié)構(gòu)破壞，肝間質(zhì)廣泛纖維組織增生，將正常肝小葉分割成大小不等的肝細(xì)胞團(tuán)(即假小葉形成)，間質(zhì)內(nèi)彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。同時(shí)肝細(xì)胞變性和增生反應(yīng)明顯。肝細(xì)胞變性表現(xiàn)為肝細(xì)胞胞獎(jiǎng)內(nèi)形成空泡(脂肪變性)肝細(xì)胞腫大，胞漿呈氣球樣。增生反應(yīng)表現(xiàn)為肝細(xì)胞核大，著色深或雙核，胞漿著色亦深，偏嗜堿性。還可見(jiàn)肝細(xì)胞成片壞死，胞漿紅染，核消失。高劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)因纖維組織分割而紊亂，但纖維組織間隔細(xì)窄，炎細(xì)胞較少，原肝小葉沒(méi)有被完全分割，中央

8、靜脈、匯管區(qū)仍有殘存，肝細(xì)胞索排列、肝細(xì)胞形態(tài)與正常者相似。低劑量組和對(duì)照組纖維間隔變寬，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，有些小葉被完全分割。肝細(xì)胞形態(tài)接近正常，變性和增生反應(yīng)不明顯。
　　 3、消癓軟肝方對(duì)肝硬化大鼠肝組織中MMP-1及TIMP-1表達(dá)的影響
　　 模型組大鼠肝組織MMP-1(0.125±0.035)和TIMP-1(0.283±0.029)表達(dá)較正常組(0.098±0.014，0.089±0.011)明顯增強(qiáng)(P<0.

9、05或P<0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)后，各用藥組大鼠肝組織MMP-1的表達(dá)較模型組增強(qiáng)(P<0.01)，TIMP-1的表達(dá)均較模型組減弱(P<0.01)。其中，高劑量組MMP-1(0.282±0.019)的表達(dá)強(qiáng)于對(duì)照組(0.222±0.024)(P<0.05)，而低劑量組(0.236±0.027)與對(duì)照組之間未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)；高劑量組TIMP-1(0.159±0.023)的表達(dá)低于低劑量組(0.195±0.031)、對(duì)照組(0

10、.198±0.027)(P<0.05)，而低劑量組與對(duì)照組之間未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、消癓軟肝方具有顯著的減輕肝硬化大鼠的病理?yè)p害，保護(hù)肝細(xì)胞，改善肝功能，促進(jìn)蛋白合成的作用，為治療肝硬化的有效藥物。
　　 2、肝硬化時(shí)肝組織中MMP-1和TIMP-1表達(dá)明顯增強(qiáng)，說(shuō)明MMP-1和TIMP-1表達(dá)的異常改變與肝硬化的發(fā)生與發(fā)展具有密切關(guān)系。消癓軟肝方可通過(guò)促進(jìn)肝組織中MMP-1的表