甘蔗葉黃酮類成分與生物活性研究.pdf

1、目的：本文以甘蔗(Saccharum sinense Roxb.)的葉為研究對(duì)象，首先對(duì)甘蔗葉總黃酮展開提取與純化工藝研究及其多種品種黃酮的含量測(cè)定，同時(shí)結(jié)合藥效篩選追蹤，研究甘蔗葉中黃酮類化學(xué)成分，為開發(fā)具有抗腫瘤抗齲齒活性的新的藥用資源提供物質(zhì)基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。
　　方法：本文采用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)化乙醇回流提取甘蔗葉總黃酮工藝，并考察不同極性的大孔樹脂對(duì)甘蔗葉總黃酮的靜態(tài)吸附量和解吸率，確定甘蔗葉總黃酮最佳提取純化工藝。以

2、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色法考察10種蔗葉品種在不同時(shí)期總黃酮?jiǎng)討B(tài)累積情況，以期獲取不同甘蔗葉黃酮的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)合活性追蹤方法，采用聚酰胺柱色譜法、葡聚糖凝膠 LH-20色譜法和重結(jié)晶法等現(xiàn)代分離方法和技術(shù)對(duì)甘蔗葉黃酮成分進(jìn)行化學(xué)成分的分離純化，通過理化檢驗(yàn)、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR和MS等方法對(duì)所得化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。甘蔗葉黃酮類成分體外抗腫瘤活性研究，運(yùn)用MTT法分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞株 BEL740

3、4，SK-OV-3，NCI-H460，CNE，Caco-2，Hela共六種癌細(xì)胞，以 IC50為考察指標(biāo)確定其抗腫瘤活性物質(zhì)。甘蔗葉黃酮類成分抗齲齒活性研究，采用二倍稀釋法分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的變異鏈球菌和粘性放線菌，確定各成分的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。
　　結(jié)果：甘蔗葉提取總黃酮提取工藝結(jié)果表明最佳提取工藝為提取溫度為70℃，提取乙醇濃度為70％，提取時(shí)間為4h，固液比為1:25，甘蔗葉總黃酮純化AB-8大孔

4、樹脂，吸附率為57.57%，解吸率為77.26%。通過比較甘蔗葉10種品種不同采收期的總黃酮含量差異，發(fā)現(xiàn)總黃酮含量最高是采摘于11月的桂糖00236（23.208mg/g），其他品種相應(yīng)的最佳采收期主要集中在10月到11月之間。從甘蔗葉中分離得到3個(gè)化合物，并鑒定3個(gè)化合物，分別為：5,7,4′-三羥基-3′,5′-二甲氧基黃酮即苜蓿素（tricin，SC1）、5,7,4′-三羥基黃酮-8-C-β-D-葡萄糖苷即牡荊素(vitexin

5、，SC2)和5,7,3′,4′-四羥基黃酮-8-C-β-D-葡萄糖苷即葒草素（orientin，SC3），以上3個(gè)化合物均為首次從該植物中分離得到。通過甘蔗葉黃酮成分對(duì)多種細(xì)胞株，結(jié)果表明甘蔗葉黃酮組分均表現(xiàn)出一定的抑制活性，其中單體 SC1對(duì) BEL7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE，Hela和Caco-2腫瘤細(xì)胞有抑制作用且存在劑量依賴性，IC50分別為55.50μg/mL、108.07μg/mL、192.90μg/

6、mL、73.82μg/mL、121.5μg/mL和198.12μg/mL；甘蔗葉黃酮SC2對(duì)BEL7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE和Hela腫瘤細(xì)胞均有明顯的抑制作用，IC50分別為152.43μg/mL、282.87μg/mL、276.75μg/mL、139.18μg/mL和277.52μg/mL；甘蔗葉黃酮SC3對(duì)BEL7404和Hela有明顯的抑制作用，IC50為176.68μg/mL和230.14μg/mL。通

7、過研究黃酮成分對(duì)變異鏈球菌和粘性放線菌的作用結(jié)果表明，總黃酮95%乙醇洗脫流份（S5）和0.1%乙酸醇溶液洗脫流份（S6）對(duì)變異鏈球菌和粘性放線菌的最小抑菌濃度均為1mg/mL；S6對(duì)變異鏈球菌最小殺菌濃度為4mg/mL。
　　結(jié)論：甘蔗葉總黃酮提取工藝中發(fā)現(xiàn)乙醇濃度影響最大，提取溫度次之；純化工藝中AB-8大孔樹脂吸附和解吸率優(yōu)于其他3種大孔樹脂。通過考察10種甘蔗葉品種不同采收期的總黃酮?jiǎng)討B(tài)累積情況可知，總黃酮含量最高的是采摘

8、于11月的桂糖00236。從甘蔗葉總黃酮中首次分離得到3個(gè)化合物：苜蓿素（tricin）、牡荊素(vitexin)和葒草素（orientin）。甘蔗葉黃酮類成分抗腫瘤篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物 SC1對(duì)BEL7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE，Hela和Caco-2腫瘤細(xì)胞具有一定的體外抑制活性；化合物SC2對(duì)BEL7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE和Hela腫瘤細(xì)胞具有一定的體外抑制活性；化合物SC3對(duì)BEL7