雌激素受體GPR30在糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能紊亂及高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷中的保護作用.pdf

1、研究背景及目的
　　糖尿病可引起血管功能改變，造成血管損傷從而增加心血管疾病的發(fā)病率，在絕經(jīng)期婦女尤為顯著。采用雌激素替代治療（HRT）可顯著降低糖尿病及其心血管并發(fā)癥的發(fā)病率，成為絕經(jīng)期婦女預(yù)防和治療糖尿病及心血管疾病的有效措施。但目前臨床應(yīng)用的雌激素替代治療有非特異性作用帶來的弊端。雌激素受體GPR30是近些年發(fā)現(xiàn)并確立的第三類雌激素膜受體。目前已有文獻報道，GPR30特異性激動劑G1可使動脈血管產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性舒張，同時給予一

2、氧化氮合酶阻斷劑（L-NAME）后這種血管舒張作用得到有效地阻斷，提示激動GPR30可通過促進血管內(nèi)皮細胞一氧化氮（NO）的釋放達到舒張血管的作用。在糖尿病狀態(tài)下血管內(nèi)皮細胞發(fā)生功能上的障礙甚至凋亡，導(dǎo)致NO水平明顯降低。而目前已證實NO在維持血管內(nèi)皮細胞功能方面起到重要作用。同時有研究表明GPR30缺陷的雌性小鼠表現(xiàn)出高血糖、糖耐量降低、阻礙骨骼生長和血壓升高，從而提示GPR30可能在調(diào)控胰腺β細胞釋放胰島素的方面起到重要作用[1]。

3、據(jù)此本課題推測雌激素受體GPR30的激活有可能抑制糖尿病導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細胞損傷，提示其有潛在的防治糖尿病心血管并發(fā)癥的作用。本課題研究GPR30對糖尿病引起血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用與機制，為預(yù)防糖尿病和絕經(jīng)后婦女心血管損傷提供新的藥物作用靶點,為探索新的選擇性雌激素心血管保護策略提供理論依據(jù)。
　　研究方法
　　本實驗分別采用實驗性糖尿病大鼠模型以及高糖損傷血管內(nèi)皮細胞來評價GPR30的體內(nèi)體外作用。采用離體血管灌流、比色

4、法、PI-Hoechst33258雙染、MTT、免疫熒光染色、蛋白免疫印跡（Westernblot）等技術(shù)，觀察：①GPR30對糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細胞的影響；②GPR30在血管內(nèi)皮細胞的定位分析；③GPR30對高糖引起的血管內(nèi)皮細胞凋亡的影響；④GPR30對PI3K-AKT-eNOS生存信號通路的影響。
　　研究結(jié)果
　　1．GPR30特異性激動劑（G1）可使雌性卵巢切除大鼠及糖尿病雌性卵巢切除大鼠主動脈血管產(chǎn)生濃度依賴性舒

5、張作用；同時，G1可降低因去氧腎上腺素（PE）誘導(dǎo)的糖尿病雌性卵巢切除大鼠主動脈血管濃度依賴性收縮作用；G1的這些作用可被L-NAME（一氧化氮合酶抑制劑）及G15（GPR30特異性阻斷劑）阻斷；
　　2．長期給予G1能有效保護的糖尿病大鼠主動脈內(nèi)皮依賴性舒張功能；
　　3．G1可有效阻礙高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞凋亡，同時可增強p-Akt和p-eNOS表達、促使NO合成，PI3K阻斷劑LY294002及G15可有效阻斷G1的抗