背根神經(jīng)節(jié)移植環(huán)境的實驗性研究.pdf

1、目的：周圍神經(jīng)損傷的治療雖然在臨床上取得顯著進(jìn)步，但療效仍不十分滿意。其原因在于(1)神經(jīng)再生速度緩慢(通常每天1mm)。(2)近端的神經(jīng)元發(fā)生不同程度的變性、壞死。(3)遠(yuǎn)端的效應(yīng)器，尤其是骨骼肌，產(chǎn)生失神經(jīng)改變即萎縮、變性甚至壞死。在許多病例中，失神經(jīng)支配的骨骼肌往往在還未得到有效的神經(jīng)再支配前就已發(fā)生了不可逆的變性，即使神經(jīng)再生到骨骼肌，也無法恢復(fù)其功能。因此延緩失神經(jīng)肌肉萎縮的速度和程度，是解決重獲神經(jīng)再支配后肌肉能否恢復(fù)有效功

2、能的關(guān)鍵。成活的神經(jīng)元能夠在與中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺乏聯(lián)系的情況下發(fā)出神經(jīng)軸突，營養(yǎng)失神經(jīng)骨骼肌。利用其上述特點，如果將含有神經(jīng)元細(xì)胞的背根神經(jīng)節(jié)吻和于受損神經(jīng)入肌點，就可以達(dá)到延緩失神經(jīng)骨骼肌的萎縮。脊神經(jīng)根為脊神經(jīng)的起始部，由背根及腹根組成，他們是脊髓交界的一段短神經(jīng)纖維，是中樞神經(jīng)纖維轉(zhuǎn)變?yōu)橥庵苌窠?jīng)纖維的部分，稱為中樞-周圍移行區(qū)。背根神經(jīng)節(jié)(DRGs)即大量密集的感覺神經(jīng)元的胞體。然而在完整摘取背根神經(jīng)節(jié)治療肌萎縮的實驗中，背根神經(jīng)節(jié)中

3、央均出現(xiàn)不同程度壞死，因此在何種環(huán)境下保存背根神經(jīng)節(jié)，增加其在移植環(huán)境下的成活神經(jīng)元胞體的數(shù)量，降低其死亡率，是利用背根神經(jīng)節(jié)移植減少靶肌肉的萎縮，促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的關(guān)鍵。 DRGs是臂叢根性損傷患者在受傷后廢棄的組織，如果能夠利用其上述特點，將其摘取后移植于受損神經(jīng)入肌點，那么將大大減少肌萎縮，并對其它部位不造成副損傷，從而為周圍神經(jīng)損傷的治療創(chuàng)造了良好的前提條件。本實驗擬通過研究成年大鼠背根神經(jīng)節(jié)的移植、增生條件，觀察其

4、在不同環(huán)境下移植后的生長及成活情況，并討論其在人體內(nèi)移植的可行性，從而為進(jìn)一步研究成年大鼠及人背根神經(jīng)節(jié)移植入受損神經(jīng)的變化和作用打下基礎(chǔ)。方法：1神經(jīng)節(jié)的移植：實驗動物SD大鼠45只，體重430-450g，雌雄不限，每個時相點9只。隨機(jī)分成A、B、C三組，將A組SD大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上，1％戊巴比妥鈉以每千克體重40mg腹腔麻醉后，背部用剪刀去毛，觸到最下一根肋骨所連棘突后，再向下三個椎間隙處約為L4L5脊椎體表投影。于無菌條件下

5、切開其上方皮膚，分離皮下，完整的暴露出L4、L5棘突。在顯微鏡下于L4、L5椎間隙處用咬骨鉗打開腰椎椎板和側(cè)突，可見黃韌帶包裹下的脊髓。小心用顯微彈簧剪剪開黃韌帶暴露脊髓，可見到連于脊髓之上的背根神經(jīng)節(jié)，膨大成球形，顯微彈簧剪摘取L4背根神經(jīng)節(jié)，完整取出一側(cè)的L4背根神經(jīng)節(jié)，將其放置于大鼠一側(cè)下腹部皮下脂肪內(nèi)(下腹部無大動脈及神經(jīng))，縫合皮膚。同樣方法摘取B、C組一側(cè)L4神經(jīng)節(jié)，B組將其分開置于股四頭肌肌肉內(nèi)，C組剝離神經(jīng)外膜后放置于股

6、四頭肌肌肉內(nèi)。2觀察指標(biāo)：(1)Nissl染色光鏡下觀察：于移植后3、7、14、21、28d將背根神經(jīng)節(jié)取出，脫水固定后，石蠟包埋，6μm切片，進(jìn)行Nissl染色，光鏡下觀察脊髓細(xì)胞移植入不同部位后的變化。 (2)HE染色光鏡下觀察：主要觀察背根神經(jīng)節(jié)中成纖維細(xì)胞增生及血管再生情況。(3)標(biāo)本經(jīng)FCA試劑盒處理后流氏細(xì)胞儀計數(shù)壞死率。 結(jié)果：大體觀察可見背根神經(jīng)節(jié)埋于皮下組的周圍組織對其包裹，并有明顯的血管袢呈放射狀聚集周圍，表

7、明其與周圍建立血運(yùn)。包埋于肌肉組血管袢增生更加明顯。光鏡下顯示三種環(huán)境下的脊髓背根神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)元均有不同程度的壞死，三天達(dá)到高峰，以后逐漸減少。大量的神經(jīng)元細(xì)胞成簇狀積聚于神經(jīng)節(jié)的邊緣。移植于皮下組由于血運(yùn)較差中央纖維化明顯，僅靠近邊緣處有神經(jīng)元存活。而肌肉內(nèi)因為含有豐富的血運(yùn)可以有效的保護(hù)神經(jīng)元減少其壞死，因此邊緣存活的神經(jīng)元數(shù)目較多，中央地區(qū)偶見。隨著時間的延長，三組壞死率均逐漸減少，且三組移植神經(jīng)節(jié)中央均出現(xiàn)大量的成纖維細(xì)胞，但皮

8、下內(nèi)組更加明顯。形態(tài)學(xué)改變可見術(shù)后三天各組背根神經(jīng)節(jié)均可見到神經(jīng)元細(xì)胞減少，并出現(xiàn)核破裂、細(xì)胞腫脹變形及溶解，胞漿著色不均勻，細(xì)胞形態(tài)各異，大小不一，呈多極性長突起及多突起，神經(jīng)元細(xì)胞周圍有成纖維細(xì)胞出現(xiàn)，放置于皮下組的較放置于肌肉內(nèi)的B、C組更為多見。1周后出現(xiàn)尼氏小體消散、溶解，即嗜色質(zhì)溶解現(xiàn)象。約于兩周時達(dá)到高峰，皮下組稍延遲一周。隨著時間的延長，三到五周時神經(jīng)節(jié)中央出現(xiàn)大量的成纖維細(xì)胞增生，分布不均，著色較深，有少量炎細(xì)胞浸潤，

9、并有吞噬神經(jīng)元現(xiàn)象。幸存的神經(jīng)元細(xì)胞退行性變化逐漸消失，核仁變?yōu)轱@著，尼氏小體再次出現(xiàn)，并可見環(huán)繞細(xì)胞核的嗜堿性輪緣。放置于肌肉內(nèi)的B、C組中央可見少量胞核完整的神經(jīng)元細(xì)胞成簇狀積聚，胞漿顆粒均勻、豐富。 結(jié)論：本實驗的結(jié)果說明：豐富的血運(yùn)可有效的阻止神經(jīng)元的溶解破壞，減少成纖維細(xì)胞及炎細(xì)胞增生，從而減少了對神經(jīng)元細(xì)胞的吞噬破壞作用。神經(jīng)節(jié)的外膜對神經(jīng)元的血運(yùn)影響無明顯差別，因而對其存活也無明顯影響。臨床上如將廢棄的神經(jīng)節(jié)吻合于