背根神經(jīng)節(jié)GABAA受體調(diào)控對神經(jīng)痛的治療作用及其機制研究.pdf

1、第一部分背根神經(jīng)節(jié)GABAA 受體調(diào)控對大鼠慢性神經(jīng)痛的治療作用
　　 目的:探討損傷和鄰近未損傷大鼠背根神經(jīng)節(jié)GABAA 受在L5SNL 大鼠神經(jīng)痛發(fā)生發(fā)展中的作用，為神經(jīng)痛的治療尋找新的靶點。
　　 方法:選用成年雌性SD 大鼠100只，隨機分為六組，A組和B組為SNL組，各10只，于L5脊神經(jīng)結(jié)扎后分別于L5和L4DRG 局部注射生理鹽水50μl，C組為損傷DRG治療組，30只，分為C1、C2和C3 亞組，每組10

2、只，分別于L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后損傷L5背根神經(jīng)節(jié)局部注射muscimol(20μg)，bicuculline(0.15μg)和muscimol(20μg)+bicuculline(0.15μg)，D組10只，于L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后5天L5背根神經(jīng)節(jié)局部注射muscimol20μg，E組為未損傷DRG治療組，30只，分為E1、E2和E3 亞組，每組10只，分別于L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后未損傷L4 背根神經(jīng)節(jié)局部注射muscimol(20μg)，bi

3、cuculline(0.15μg)和muscimol(20μg)+bicuculline(0.15μg),F組10只，于L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后5天L4 背根神經(jīng)節(jié)局部注射muscimol20μg，從術(shù)前一天至術(shù)后10天內(nèi)，每日行為學(xué)檢測各組大鼠術(shù)側(cè)后爪熱痛閾和機械痛閾。
　　 結(jié)果:A組和B組大鼠L5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后1天機械痛閾開始下降，持續(xù)至術(shù)后10天，熱痛閾于術(shù)后3天開始下降，持續(xù)至術(shù)后10天，兩組間痛閾無明顯差異，同A組相比，C

4、1組動物術(shù)后各時間點機械痛閾和熱痛閾明顯升高，并且同術(shù)前相比沒有明顯差異，C2組于術(shù)后1天就出現(xiàn)明顯熱痛閾下降，持續(xù)至術(shù)后10天,同A組相比，術(shù)后各時間點熱痛閾和機械痛閾明顯下降，C3組術(shù)后同A組比較沒有明顯差異，D組動物注射后1天，機械痛閾和熱痛閾開始上升，于注射后2天達(dá)到高峰，注射后3天機械痛閾和熱痛閾開始下降，于注射后4天同A組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。同B組動物相比，E1組術(shù)后機械痛閾明顯升高，持續(xù)至術(shù)后10天，但同術(shù)前相比仍然較低

5、，熱痛閾于術(shù)后同B組相比無明顯差異，E2組從術(shù)后1天開始熱痛閾出現(xiàn)明顯下降，同B組相比，熱痛閾和機械痛閾在術(shù)后各個時間點上明顯下降，E3組動物術(shù)后同B組比較沒有明顯差異，F(xiàn)組動物注射后1天，同B組相比機械痛閾和熱痛閾都有所上升，注射后2天達(dá)到高峰，注射后3天下降，于注射后第4天同B組比較沒有明顯差異。
　　 結(jié)論:SNL 術(shù)后受損DRG 局部GABAA 受體調(diào)控可以預(yù)防痛覺過敏的發(fā)生，但對已經(jīng)發(fā)生的痛覺過敏只起到暫時的緩解作用。

6、未損傷DRG 局部GABAA 受體對神經(jīng)痛機械痛敏的預(yù)防有一定的作用，但對神經(jīng)痛熱痛覺過敏只有短暫的治療效果。
　　 第二部分神經(jīng)痛大鼠背根神經(jīng)元GABA含量及GABAA受體的改變
　　 目的:探討神經(jīng)痛大鼠損傷和未損傷DRG 上GABA 及其受體GABAA的表達(dá)，從而為DRG 局部注射GABAA 受體激動劑治療神經(jīng)痛提供理論依據(jù)。
　　 方法:選取30只SD 大鼠隨機分為兩組，SNL組大鼠20只，行L5脊神經(jīng)結(jié)

7、扎誘導(dǎo)神經(jīng)痛，對照組大鼠10只，行假手術(shù)，不結(jié)扎L5脊神經(jīng)，分別于術(shù)前和術(shù)后3天行行為學(xué)測手術(shù)側(cè)大鼠后爪痛閾，于手術(shù)后第5天處死大鼠，取出同側(cè)L4 及L5DRG，運用免疫組化SABC 法檢測大鼠GABA 及其受體GABAAα1 亞基的表達(dá)，并分類統(tǒng)計各組中具有免疫陽性細(xì)胞所占比例。
　　 結(jié)果:SNL 大鼠術(shù)后出現(xiàn)明顯神經(jīng)痛癥狀，對照組大鼠無明顯神經(jīng)痛癥狀，與對照組相比，SNL組L5DRG中具有GABA 免疫陽性的神經(jīng)元比例出現(xiàn)

8、明顯下降，主要為大和中DRG 神經(jīng)元中具有GABA 免疫陽性的神經(jīng)元所占比例出現(xiàn)下降，小DRG 神經(jīng)元沒有明顯改變；L4DRG中GABA 免疫陽性神經(jīng)元的比例也沒有發(fā)現(xiàn)明顯改變。L5DRG中GABAA 受體免疫陽性神經(jīng)元的比例沒有發(fā)現(xiàn)明顯改變，但大和中DRG中GABAA 免疫陽性神經(jīng)元比例明顯下降。L4DRG中具有GABAA 受體免疫陽性的神經(jīng)元比例出現(xiàn)明顯下降，主要為大和中DRG 神經(jīng)元中具有GABA 免疫陽性的神經(jīng)元所占比例出現(xiàn)下降

9、，小DRG 神經(jīng)元沒有明顯改變。
　　 結(jié)論:受損和未受損DRG 上GABA 能神經(jīng)元減少，具有GABAA 受體的神經(jīng)元數(shù)量下降，導(dǎo)致GABA 能傳遞減弱，可能是神經(jīng)痛發(fā)病機制。
　　 第三部分損傷和未損傷背根神經(jīng)節(jié)GABA 激活電流的改變以及對神經(jīng)元電生理學(xué)特征的影響
　　 目的:運用膜片鉗技術(shù)研究損傷和未損傷DRG 神經(jīng)元GABA 激活電流的改變及其對神經(jīng)元的影響。
　　 方法:成年SD 大鼠30只，

10、隨機分為兩組，SNL組20只，行L5脊神經(jīng)結(jié)扎，對照組10只，行假手術(shù)，不結(jié)扎脊神經(jīng)，術(shù)前及術(shù)后3天通過行為學(xué)測定來判斷造模成功后立即處死大鼠，急性分離對照組L4-6 及SNL組L4和L5背根神經(jīng)元，建立膜片鉗全細(xì)胞電壓鉗記錄模式，在電流鉗模式下給予階躍刺激誘發(fā)動作電位，記錄后通過細(xì)胞外加藥排管給予100μmol/lGABA 誘發(fā)GABA 電流，記錄神經(jīng)元上電流幅度，再次轉(zhuǎn)入電流鉗下記錄動作電位，對比用藥前后靜息電位及動作電位的改變。<

11、br>　　 結(jié)果:SNL 術(shù)后4天，大鼠患肢機械痛閾和熱痛閾出現(xiàn)明顯下降，對照組大部分DRG 神經(jīng)元對100μmol/lGABA 產(chǎn)生一快速失活的內(nèi)向電流，這些神經(jīng)元主要集中在大DRG 神經(jīng)元和中DRG 神經(jīng)元上，同對照組相比，SNL組L4和L5DRG神經(jīng)元中GABA 電流發(fā)生率明顯降低，主要為大和中DRG 神經(jīng)元的發(fā)生率出現(xiàn)下降，小DRG 神經(jīng)元發(fā)生率沒有明顯變化，SNL組L4和L5大和中DRG神經(jīng)元GABA電流幅度同對照組相比均明

12、顯降低，小DRG神經(jīng)元GABA電流沒有明顯差異。在具有GABA 電流的神經(jīng)元中，100μmol/lGABA 可以誘發(fā)神經(jīng)元去極化，靜息電位絕對值、動作電位幅度及誘發(fā)動作電位的基強度同用藥前相比出現(xiàn)明顯下降，對閾電位沒有明顯影響，對比SNL組和對照組用藥前后DRG 神經(jīng)元各參數(shù)的變化幅度發(fā)現(xiàn)，SNL組L5大和中DRG 神經(jīng)元靜息電位下降幅度、動作電位下降幅度以及基強度下降幅度同對照組相比明顯較低，小DRG 神經(jīng)元沒有明顯改變。L4 大DR