體外聯(lián)合誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討細(xì)胞外基質(zhì)、植物血球凝集素(phytohemagglutinin，PHA-M)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，聯(lián)合誘導(dǎo)人臍血單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cells，MNC)向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的可行性，及此體系中不同細(xì)胞外基質(zhì)(extracellula

2、r matrix，ECM)對內(nèi)皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)效率的影響。 方法： 密度梯度離心法分離臍血單個(gè)核細(xì)胞，在含有PHA、VEGF、bFGF及ECM等具有誘導(dǎo)分化作用的因子的培養(yǎng)基中進(jìn)行體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及三維體系中血管的形成；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)，半定量RT-PCR、流式細(xì)胞學(xué)等方法檢測內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記Ⅷ因子、假性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)和-氧化氮合酶(endothelial ni

3、tric oxide synthase，eNOS)及CD31的表達(dá)，并描繪細(xì)胞生長曲線，以鑒定誘導(dǎo)的細(xì)胞生物學(xué)特性及比較不同細(xì)胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)效率的影響。 結(jié)果： ①倒置顯微鏡下觀察結(jié)果：最初貼壁時(shí)細(xì)胞為小圓形，PHA刺激24小時(shí)后細(xì)胞聚集成團(tuán)，誘導(dǎo)第5天集落周邊出現(xiàn)少量梭形細(xì)胞且數(shù)量逐漸增多；7天可見線狀排列，大量典型梭形貼壁細(xì)胞生成，在三維培養(yǎng)體系中形成血管樣結(jié)構(gòu)。 ②培養(yǎng)7天，貼壁細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記FⅧ因子

4、，eNOS、vWF和CD31。 ③FN組培養(yǎng)7天后eNOS(0.476±0.072)、vWF(0.729±0.114)表達(dá)均高于其它兩組(P<0.05)；其CD31的表達(dá)率由第7天(48.04±5.34％)到第14天(72.90±8.54％)，均高于同一時(shí)間膠原組與對照組(P<0.05)。 結(jié)論： ①臍血中存在內(nèi)皮前體細(xì)胞，分離得到的單個(gè)核細(xì)胞能在體外定向誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞。 ②證實(shí)在不降低誘導(dǎo)效率的前