體外聯(lián)合誘導(dǎo)臍血單個核細胞向內(nèi)皮樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的： 探討細胞外基質(zhì)、植物血球凝集素(phytohemagglutinin，PHA-M)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，聯(lián)合誘導(dǎo)人臍血單個核細胞(mononuclear cells，MNC)向內(nèi)皮樣細胞分化的可行性，及此體系中不同細胞外基質(zhì)(extracellula

2、r matrix，ECM)對內(nèi)皮樣細胞誘導(dǎo)效率的影響。 方法： 密度梯度離心法分離臍血單個核細胞，在含有PHA、VEGF、bFGF及ECM等具有誘導(dǎo)分化作用的因子的培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及三維體系中血管的形成；應(yīng)用免疫細胞化學(xué)，半定量RT-PCR、流式細胞學(xué)等方法檢測內(nèi)皮細胞標(biāo)記Ⅷ因子、假性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)和-氧化氮合酶(endothelial ni

3、tric oxide synthase，eNOS)及CD31的表達，并描繪細胞生長曲線，以鑒定誘導(dǎo)的細胞生物學(xué)特性及比較不同細胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)效率的影響。 結(jié)果： ①倒置顯微鏡下觀察結(jié)果：最初貼壁時細胞為小圓形，PHA刺激24小時后細胞聚集成團，誘導(dǎo)第5天集落周邊出現(xiàn)少量梭形細胞且數(shù)量逐漸增多；7天可見線狀排列，大量典型梭形貼壁細胞生成，在三維培養(yǎng)體系中形成血管樣結(jié)構(gòu)。 ②培養(yǎng)7天，貼壁細胞表達內(nèi)皮細胞標(biāo)記FⅧ因子

4、，eNOS、vWF和CD31。 ③FN組培養(yǎng)7天后eNOS(0.476±0.072)、vWF(0.729±0.114)表達均高于其它兩組(P<0.05)；其CD31的表達率由第7天(48.04±5.34％)到第14天(72.90±8.54％)，均高于同一時間膠原組與對照組(P<0.05)。 結(jié)論： ①臍血中存在內(nèi)皮前體細胞，分離得到的單個核細胞能在體外定向誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細胞。 ②證實在不降低誘導(dǎo)效率的前