攜帶血管生成素的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞雙介入治療股骨頭缺血性壞死的實(shí)驗研究.pdf

1、第一部分：重組pEGFP/Ang-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞及其表達(dá)的實(shí)驗研究。目的:制備穩(wěn)定高效表達(dá)血管生成素-1(angiopoietin-1，Ang-1)的轉(zhuǎn)基因工程骨髓間質(zhì)干細(xì)胞。方法:應(yīng)用基因重組的方法構(gòu)建Ang-1真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP/Ang-1，利用脂質(zhì)體將pEGFP/Ang-1轉(zhuǎn)入骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染率，用熒光顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)。結(jié)果:質(zhì)粒酶切電泳顯示重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，轉(zhuǎn)染pEGF

2、P/Ang-1質(zhì)粒的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在熒光顯微鏡下可見綠色熒光；流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染率約50％；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測可見轉(zhuǎn)基因骨髓間質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)Ang-1蛋白。結(jié)論:成功制備表達(dá)外源性基因Ang-1的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，制備方法是可行的。 第二部分：激素性兔股骨頭缺血性壞死模型的建立及其實(shí)驗研究。目的:建立兔股骨頭缺血性壞死模型，探討激素性股骨頭壞死(ANFH)的病理發(fā)展過程及早期影像學(xué)表現(xiàn)。方法:運(yùn)用ANFH模型25只，隨機(jī)分為5組，與對

3、照組進(jìn)行比較，分別觀察注射4周、6周、8周、10周、12周股骨頭病理組織學(xué)和影像學(xué)改變。結(jié)果:ANFH最早變化發(fā)生在骨髓，然后為骨小梁。在給藥4周、6周、8周、10周、12周時，DR分別有0只、0只、0只、2只、2只兔股骨頭可見斑片狀密度減低影，CT分別有0只、0只、1只、2只、4只兔股骨頭可見囊狀透光區(qū)和斑片狀密度減低影，MRI分別有0只、3只、5只、5只、5只兔股骨頭在T1WI呈不規(guī)則低信號，T2WI呈低信號或高信號。結(jié)論:ANFH

4、的影像學(xué)表現(xiàn)與病理變化密切相關(guān)，MRI是診斷ANFH最敏感的方法。建立兔股骨頭缺血性壞死模型的方法是可行的。 第三部分：激素性兔股骨頭缺血性壞死經(jīng)雙介入治療后攜帶Ang-1的MSCs在股骨頭內(nèi)的轉(zhuǎn)染與表達(dá)。目的:建立兔股骨頭壞死模型，探討雙介入治療方法的可行性，檢測治療后股骨頭的轉(zhuǎn)染率及表達(dá)。方法:用激素建立兔股骨頭壞死模型，采用經(jīng)頸動脈穿刺，行超選擇插管至雙側(cè)股骨頭供血動脈，緩慢注入攜帶Ang-1的MSCs,然后經(jīng)皮穿刺于股骨

5、頭鉆孔，直接注入攜帶Ang-1的MSCs，作者把這兩者相結(jié)合稱雙介入治療，術(shù)后2、4、6、8周分別處死動物，進(jìn)行免疫組化染色、熒光檢測，測定轉(zhuǎn)染率及熒光蛋白的表達(dá)。結(jié)果:實(shí)驗組在熒光顯微鏡下見轉(zhuǎn)染pEGFP/Ang-1質(zhì)粒的MSCs分化的細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光，股骨頭內(nèi)高表達(dá)Ang-1基因，循環(huán)血管增多，成骨細(xì)胞增多。結(jié)論:攜帶Ang-1的MSCs不僅能促進(jìn)毛細(xì)血管的生成，而且能定向進(jìn)行骨分化。 第四部分：攜帶血管生成素的骨髓間質(zhì)干細(xì)

6、胞對股骨頭缺血性壞死模型實(shí)驗修復(fù)過程的影響。目的:探討攜帶血管生成素基因(Ang-1)的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)對股骨頭缺血性壞死的修復(fù)作用。方法:用激素建立兔股骨頭壞死模型，采用雙介入治療后2、4、6、8周分別于處死動物前進(jìn)行DR、CT、MRI、DSA檢查，觀察骨質(zhì)及血管情況。結(jié)果:(1)通過DR值對骨密度進(jìn)行分析，實(shí)驗組(治療組)股骨頭密度明顯高于同期對照組。(2)CT、MRI灌注成像觀察微循環(huán)，見實(shí)驗組的血流量高于同期對照組。(