SPIO生物探針標(biāo)記CD4+T淋巴細(xì)胞的MRI移植免疫成像研究.pdf

1、目的：應(yīng)用SPIO MRI生物探針特異性地標(biāo)記胰島移植早期排斥反應(yīng)主要效應(yīng)細(xì)胞CD4+T淋巴細(xì)胞，并通過MRI對標(biāo)記細(xì)胞進行體外及體內(nèi)成像，從而研究CD4+SPIO MRI生物探針作為特異性的MR對比劑，在分子水平早期診斷胰島移植后細(xì)胞性免疫排斥反應(yīng)的可行性。 材料與方法： 體外實驗：SPIO MRI生物探針標(biāo)記人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞；普魯士藍染色法及透射電鏡觀察SPIO微粒與CD4+T細(xì)胞的特異性結(jié)合；原子分光光度

2、計定量測定SPIO探針鐵微粒含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測分選純度及標(biāo)記細(xì)胞凋亡率，臺盼藍法檢測標(biāo)記細(xì)胞活力，四唑鹽比色法檢測標(biāo)記細(xì)胞增殖情況。應(yīng)用MRI T2WI序列體外對標(biāo)記細(xì)胞成像。 體內(nèi)實驗：15只Balb/c裸鼠左腎包膜下豬胰島細(xì)胞移植模型分為實驗組和對照組，實驗組(n=10)：腹腔注入107標(biāo)記細(xì)胞；對照組：尾靜脈注射非免疫SPIO 20μmol Fe/kg。免疫注射后3、7，14天，1.5T MRI T1WI及T2WI對左腎

3、包膜胰島移植物區(qū)活體成像，并與組織學(xué)證實的左腎包膜下胰島移植物標(biāo)記CD4+T淋巴細(xì)胞浸潤所致的免疫排斥反應(yīng)比較。 結(jié)果： 1.體外實驗： 1.1、 SPIO生物探針標(biāo)記CD4+T細(xì)胞純度為99.8％，原子分光光度計檢測到標(biāo)記5×106及107T細(xì)胞所需的探針?biāo)琒PIO微粒濃度為0.21、1.39μg/ml。普魯士藍染色可觀察到CD4+T細(xì)胞表面的陽性藍染鐵顆粒；透射電鏡顯示SPIO探針特異性與CD4+T淋巴細(xì)胞

4、表面抗原結(jié)合。 標(biāo)記前細(xì)胞和標(biāo)記后的細(xì)胞問臺盼藍拒染率無統(tǒng)計學(xué)差異.標(biāo)記細(xì)胞凋亡率約1.36～3.6％；四唑鹽比色法檢測細(xì)胞增殖情況，72小時后10～40μg濃度SPIO探針中標(biāo)記細(xì)胞的光吸收值無顯著差異(p<0.05)。 1.2、 MRI體外顯像標(biāo)記細(xì)胞：5×106/ml標(biāo)記細(xì)胞在MRI T2WI掃描中表現(xiàn)MRI信號降低：107標(biāo)記細(xì)胞有明顯的MRI信號改變；隨著標(biāo)記細(xì)胞的減少，MRI信號改變相應(yīng)減輕。 2.

5、體內(nèi)實驗： 2.1、 標(biāo)記細(xì)胞的MRI體內(nèi)成像：實驗組動物于免疫注射SPIO探針后第7天，MRI T2WI檢測到左腎包膜下胰島移植物信號降低。注入非免疫SPIO的對照組動物左腎包膜下移植區(qū)未見信號變化。 2.2、 組織學(xué)檢查：實驗組動物在MRI圖象信號改變的位點，HE染色可見左腎包膜下胰島移植物內(nèi)見大量淋巴細(xì)胞浸潤，普魯士蘭染色顯示陽性鐵微粒分布，免疫組化證實了左腎包膜下移植物內(nèi)CD4+染色陽性細(xì)胞的浸潤。而對照組動物左