HPV16治療性無佐劑重組疫苗——Hsp65-E6-E7在大腸桿菌中的表達、純化及其功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　目的：構(gòu)建HPV16無佐劑治療性重組蛋白疫苗Hsp65-E6/E7表達載體，篩選穩(wěn)定的高表達該疫苗的菌株，優(yōu)化Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的純化和復性技術(shù)條件，研究該疫苗抗HPV16型病毒相關(guān)腫瘤的生物學效應。方法：通過PCR技術(shù)自我國山西宮頸癌高發(fā)現(xiàn)場分離到的毒株-HPV16Z中獲得E6/E7轉(zhuǎn)化基因片段，自卡介苗菌株中克隆獲得Hsp65基因片段；對E6/E7基因片段定點突變修飾，以消除該轉(zhuǎn)化基因的致癌潛能；構(gòu)建ET28a-

2、Hsp65-E6/E7表達載體，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達融合蛋白，并篩選穩(wěn)定的高表達菌株；研究影響Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的表達條件；研究和初步建立重組蛋白疫苗的純化方案和工藝；研究重組蛋白疫苗誘導的細胞特異性免疫反應和該疫苗對小鼠TC-1腫瘤細胞移植瘤的體內(nèi)治療作用。結(jié)論：獲得穩(wěn)定高表達Hsp65-E6/E7重組蛋白疫苗的大腸桿菌BL21(DE3)株；優(yōu)化了發(fā)酵、表達、復性和純化工藝，使該疫苗純度達95％以上；體外

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