2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討藤黃酸(Gambogic acid,GA)聯(lián)合常用化療藥物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、奧沙利鉑(Oxaliplatin,Oxa)、多西紫杉醇(Docetaxel,Doc)體外對人胃癌細(xì)胞株BGC.823、MKN-28和人大腸癌細(xì)胞株LOVO、SW-116生長的影響及可能機(jī)制。
   方法:1、采用MTT法檢測并確定GA、5-FU、Oxa、Doc單藥作用于指數(shù)增殖期人胃癌細(xì)胞株BGC-823、

2、MKN-28和人大腸癌細(xì)胞株LOVO、SW-116的IC50;2、依據(jù)單藥作用下的IC50,確定聯(lián)合用藥濃度梯度,GA分別聯(lián)合5-FU、Oxa或Doc作用于上述4株腫瘤細(xì)胞,應(yīng)用MTT法檢測聯(lián)合用藥對腫瘤細(xì)胞生長的抑制效應(yīng);3、應(yīng)用中效原理(Median-effect Principle,Chou- Talalay聯(lián)合指數(shù)法)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,繪制單藥及聯(lián)合用藥對腫瘤細(xì)胞生長的劑量-效應(yīng)曲線,確定聯(lián)合用藥時(shí)對腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)(Fa)與合用指數(shù)

3、(CI)的關(guān)系,判定藥物間的相互作用;4、對于在較低濃度下合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)的腫瘤細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測GA聯(lián)合3種化療藥物對其凋亡的影響;5、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測GA對4株腫瘤細(xì)胞細(xì)胞增殖周期的影響;6、應(yīng)用RT-PCR檢測比較兩組之間療效相關(guān)基因或凋亡抑制基因的表達(dá)差異,觀察GA對5-FU、奧沙利鉑、多西紫杉醇藥物療效相關(guān)基因影響及對腫瘤細(xì)胞凋亡抑制基因的影響。從而推斷GA與化療藥物間相互作用的分子機(jī)制。
   結(jié)果:
 

4、  1、BGC-823細(xì)胞株:4種藥物單藥作用于指數(shù)增殖期的BGC-823細(xì)胞,48小時(shí)的IC50值分別為:GA2.332±0.046μM,5-FU332.807±97.366μM,Oxa10.501±2.735μM,Doc4.933±0.567μM.GA聯(lián)合5-FU作用于指數(shù)增殖期BGC-823細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.25,CI<1,兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng);GA聯(lián)合Oxa作用于指數(shù)增殖期BGC-823細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.10,CI<1,兩藥合

5、用效應(yīng)協(xié)同;GA聯(lián)合Doc作用于指數(shù)增殖期BGC-823細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.15,CI<1,兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。細(xì)胞凋亡檢測也證實(shí)GA聯(lián)合5-FU、Oxa、Doc均可產(chǎn)生協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效應(yīng)。
   2、MKN-28細(xì)胞株:4種藥物單藥作用于指數(shù)增殖期的MKN-28細(xì)胞,48小時(shí)的IC50值分別為:GA1.662±0.112μM,5-FU18.844±1.969μM,Oxa15.141±1.188μM,Doc8.627±1

6、.900μM.GA聯(lián)合5-FU或Oxa作用于指數(shù)增殖期MKN-28細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.5,兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),CI<1;GA聯(lián)合Doc作用于指數(shù)增殖期MKN-28細(xì)胞,無論在高濃度還是較低濃度用藥,均產(chǎn)生較好的協(xié)同效應(yīng),CI均<1.應(yīng)用較低濃度的GA聯(lián)合Doc作用于MKN-28細(xì)胞,也證實(shí)GA聯(lián)合Doc,聯(lián)合組Annexin V+/PI-(早期凋亡)及Annexin V+/PI+(晚期凋亡或壞死細(xì)胞)所占比例明顯增多。
   3

7、、LOVO細(xì)胞株:4種藥物單藥作用于指數(shù)增殖期的LOVO細(xì)胞,48小時(shí)的IC50值分另q為:GA1.207±0.106μM,5-FU8.325±0.912μM,Oxa1.818±0.184μM,Doc4.491±0.735μM。GA聯(lián)合5-FU或Oxa作用于指數(shù)增殖期LOVO細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.55,CI<1,兩藥聯(lián)合產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng);GA聯(lián)合Doc作用于指數(shù)增殖期LOVO細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.25,CI<1,兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),取1.0μM的

8、GA,2.5μM的Doc,單藥或聯(lián)合應(yīng)用作用于LOVO細(xì)胞,48hr后行細(xì)胞凋亡檢測,也證實(shí)GA聯(lián)合Doc,聯(lián)合組Annexin V+/PI-(早期凋亡)和Annexin V+/PI+(晚期凋亡或壞死細(xì)胞)所占比例明顯增多。
   4、SW-116細(xì)胞株:4種藥物單藥作用于指數(shù)增殖期的SW-116細(xì)胞,48小時(shí)的IC50值分別為:GA2.135±0.327μM,5-FU35.230±5.749μM,Oxa4.063±0.453μ

9、M,Doc1.774±0.434μM.GA聯(lián)合5-FU作用于指數(shù)增殖期SW-116細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.55,即較大藥物劑量合用時(shí),兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),CI<1;GA聯(lián)合Oxa作用于指數(shù)增殖期SW-116細(xì)胞,無論是較大藥物劑量聯(lián)合使用,抑或是較低劑量聯(lián)合,兩藥合用均只產(chǎn)生拮抗效應(yīng)。GA聯(lián)合Doc作用于指數(shù)增殖期SW-116細(xì)胞,當(dāng)Fa>0.4,兩藥合用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),CI<1.應(yīng)用1.0μM的GA,2.5μM的Doc,單藥或朕合作用于SW

10、-116細(xì)胞,48br后行細(xì)胞凋亡檢測,也證實(shí)GA聯(lián)合Doc,聯(lián)合組Annexin V+/PI-(早期凋亡)和/或Annexin V+/PI+(晚期凋亡或壞死細(xì)胞)所占比例明顯增多。
   5、GA對四種腫瘤細(xì)胞株細(xì)胞增殖周期的影響:GA作用于BGC-823細(xì)胞48hr,細(xì)胞發(fā)生明顯的G2/M期阻滯;而作用于MKN-28細(xì)胞、LOVO細(xì)胞及SW-116細(xì)胞,均發(fā)生較明顯的G0/G1阻滯,G2/M期細(xì)胞比例亦增多,而S期細(xì)胞比例明

11、顯減少。
   6、GA對3種化療藥物療效相關(guān)基因的影響:應(yīng)用RT-PCR檢測比較GA作用前后BGC-823細(xì)胞藥物療效相關(guān)基因的表達(dá).結(jié)果,GA明顯下調(diào)5-FU、Oxa及Doc療效相關(guān)基因TS、OPRT、ERCC1、BRCA1、tau及β-tublin-ⅢmRNA基因表達(dá).其中,TS下調(diào)至0.009,OPRT下調(diào)至0.745,ERCC1 mRNA下調(diào)至0.070,BRCA1 mRNA下調(diào)至0.140,tau mRNA下調(diào)至0.

12、267,β-tublin-III mRNA下調(diào)至0.624。
   7、GA對腫瘤細(xì)胞凋亡抑制基因survivin mRNA表達(dá)的影響:應(yīng)用RT-PCR檢測并比較GA作用前后BGC-823細(xì)胞凋亡抑制基因survivin mRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn):GA明顯下調(diào)BGC-823細(xì)胞凋亡抑制基因survivin mRNA表達(dá)。
   結(jié)論:
   1、單藥應(yīng)用時(shí),GA對4株腫瘤細(xì)胞均有抗腫瘤活性,根據(jù)所測IC50值,LOVO細(xì)

13、胞對其最為敏感。
   2、GA與三種化療藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí),不同的細(xì)胞株,聯(lián)合用藥效應(yīng)不同。GA與Doc聯(lián)合作用于四株腫瘤細(xì)胞時(shí)在低濃度即可發(fā)揮協(xié)同效應(yīng);GA與Oxa或5-FU聯(lián)合應(yīng)用時(shí),除BGC-823細(xì)胞外,均需在較高濃度才可能發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同效應(yīng),甚或不產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),如GA與Oxa聯(lián)合作用于SW-116細(xì)胞。
   3、GA可以通過增加腫瘤細(xì)胞的凋亡和/或死亡從而發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同效應(yīng)。
   4、GA可以通過抑制

14、腫瘤細(xì)胞進(jìn)入增殖周期,或抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成,或殺滅S期細(xì)胞,或產(chǎn)生G2/M期阻滯,發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同效應(yīng)。
   5、GA可以通過改變藥物療效相關(guān)基因表達(dá),發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同效應(yīng)。
   6、GA可以通過改變腫瘤細(xì)胞株凋亡相關(guān)基因表達(dá),發(fā)揮抗腫瘤協(xié)同效應(yīng)。
   7、二株大腸癌細(xì)胞株對Doc的敏感性高于二株胃癌細(xì)胞株,改變了大腸癌細(xì)胞對Doc天然耐藥的印象.臨床上,應(yīng)該根據(jù)藥物療效相關(guān)基因的表達(dá)情況,合理、個(gè)體化選擇

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