紅松合子胚愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽發(fā)生的研究.pdf

1、紅松（Pinus koraiensis）是我國東北地區(qū)極其重要的優(yōu)質(zhì)用材樹種，也是發(fā)展前景巨大的堅果經(jīng)濟林樹種。進行紅松體細(xì)胞胚胎發(fā)生和不定芽發(fā)生研究，既可以為其生物學(xué)研究提供有效組培體系，又可以直接用于優(yōu)良種質(zhì)材料的無性擴繁。但是，目前有關(guān)紅松組織培養(yǎng)的研究資料很少見。本項研究以紅松成熟和未成熟合子胚為試驗材料，對紅松愈傷組織誘導(dǎo)和增殖的影響因素，及不定芽發(fā)生的條件進行了初步研究，以便為體細(xì)胞胚胎發(fā)生和通過不定芽途徑進行植株再生奠定基

2、礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：
　　(1)紅松愈傷組織的誘導(dǎo)與合子胚外植體采集時期密切相關(guān)。在6月下旬至7月下旬取材時，合子胚處于前子葉期及子葉期，此時愈傷組織不易誘導(dǎo)和保持，有效愈傷誘導(dǎo)率幾乎為0;8月中旬至9月下旬取材時，合子胚趨近成熟時期，有效愈傷組織誘導(dǎo)率明顯提高，但較容易轉(zhuǎn)為非胚性愈傷組織;10月份取材時，合子胚處于成熟期，此時有效愈傷組織誘導(dǎo)的頻率和質(zhì)量都很高，且能較長時間的保持旺盛分化和鮮活狀態(tài)。
　　(2)不同的培養(yǎng)基對

3、有效愈傷組織的誘導(dǎo)效果不同，初始誘導(dǎo)應(yīng)選用鹽濃度較高的LM培養(yǎng)基使外植體完全脫分化，反復(fù)繼代后可以產(chǎn)生有效愈傷組織;供試的其他培養(yǎng)基繼代后極少產(chǎn)生有效愈傷組織。
　　(3)不同的激素組合和濃度配比對有效愈傷組織的誘導(dǎo)率影響不同，2，4-D是愈傷組織啟動的不可或缺的植物生長調(diào)節(jié)劑，其作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于NAA。在LM+2 mg·L-12，4-D+0.5 mg·L-16-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入0.5 mg·L-1 KT或0.5 mg·L-1

4、TDZ，可顯著提高有效愈傷組織的誘導(dǎo)率（可達75.7％）。
　　(4)對合子胚外植體進行預(yù)處理對愈傷組織的誘導(dǎo)有明顯促進效果。經(jīng)不同濃度的蔗糖、PEG6000、甘露醇溶液浸泡24 h后，愈傷組織2周后產(chǎn)生，愈傷組織多為透明疏松或白色半透明狀態(tài)，可長時間（60 d左右）保持鮮活狀態(tài)。3種處理后的合子胚甲均有效愈傷組織誘導(dǎo)率90％以上，但后期繼代大多轉(zhuǎn)為非胚性愈傷組織。
　　(5)在有效愈傷組織的增殖培養(yǎng)階段，需降低生長素和細(xì)胞

5、分裂素的濃度。添加KT的增殖效果好于6-BA。較好的增殖繼代培養(yǎng)基為LM+0.3 mg·L-12，4-D+0.2 mg·L-1KT。LM+0.01 mg·L-1TDZ也可使有效愈傷增殖率達到較高水平(60％)。
　　(6) ABA、PEG6000和甘露醇在一定濃度時對愈傷組織的增殖有促進作用。不添加激素的LM培養(yǎng)基，加入5 g·L-1 ABA時極顯著提高增殖率;加入10～15 g·L-1 PEG6000或0.5 g·L-1甘露醇時