落葉松體細胞胚形成與不定芽誘導的研究.pdf

1、本研究以合子胚為外植體誘導體細胞胚發(fā)生和不定芽誘導試驗。系統(tǒng)研究了雜種落葉松體細胞胚發(fā)生和長白落葉松器官發(fā)生過程中所涉及的各種影響因素，建立了雜種落葉松的體細胞胚發(fā)生體系與長白落葉松不定芽誘導體系。主要研究結果如下：
　　從日×長和日×興兩個雜種落葉松家系誘導出了胚性愈傷組織。雜種落葉松胚性愈傷組織適宜的誘導條件是:合子胚采集時間為6月27日～7月4日，MS、S培養(yǎng)基添加0.5、1.0mg/L2，4-D、0.05mg/L BA、0

2、.05mg/L KT，誘導出的胚性愈傷組織能夠長期繼代穩(wěn)定增殖。日5×長77-3家系容易誘導體細胞胚發(fā)生。
　　不同濃度2，4-D對胚性愈傷組織增殖有顯著的影響，胚性愈傷組織增殖率隨2，4-D濃度的升高而下降。當添加0.1mg/L2，4-D+0.1 mg/L BA+0.05 mg/L KT胚性愈傷組織增殖最快，增殖率達到4.1倍。
　　培養(yǎng)基添加不同組合植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對胚性愈傷組織增殖與維持有顯著影響。添加0.1mg/L2

3、,4-D+0.05mg/L BA+0.05mg/L KT與0.5mg/L NAA+0.05mg/L BA+0.05mg/LKT適合胚性愈傷組織增殖與長期維持。
　　將胚性愈傷組織直接由繼代培養(yǎng)基轉入成熟培養(yǎng)基上形成的體細胞胚最多。不同濃度ABA對體細胞胚的成熟有極顯著影響。形成的體細胞胚數(shù)隨ABA濃度的升高而增加，添加45mg/L ABA的成熟培養(yǎng)基形成的體細胞胚最多，1g胚性愈傷組織平均可以形成340.2個體細胞胚。添加0.2m

4、g/L IBA+15mg/L ABA平均每克胚性愈傷組織形成163.8個體細胞胚，形成的體細胞胚比單獨使用15mg/L ABA時提高了5.4倍。
　　體細胞胚成熟培養(yǎng)基添加肌醇、水解酪蛋白、谷氨酰胺的最佳濃度為250mg/L、250mg/L、750mg/L。瓊脂比膠利得更適合進行體細胞胚成熟。瓊脂濃度為9g/L時形成的體細胞胚最多，植株再生率也最高，平均每克胚性愈傷組織形成411.4個體細胞胚，植株再生率為42.1％。
　　

5、1/2MS培養(yǎng)基比較適合體細胞胚的萌發(fā)與植株再生。在培養(yǎng)基中添加200mg/L活性碳促進了體細胞胚的萌發(fā)，體細胞胚在此培養(yǎng)基上比不添加的萌發(fā)時間短，形成的植株生長勢較旺。體細胞胚的萌發(fā)率與植株再生率隨著成熟培養(yǎng)時間的延長而提高，成熟培養(yǎng)12周時體細胞胚的萌發(fā)率與植株再生率均最高(97.6％、70.5％)。
　　暗培養(yǎng)條件下，長白落葉松成熟胚誘導的愈傷組織適宜誘導不定芽。單獨使用BA誘導不定芽比與NAA共同使用的效果更好，在添加1.