蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)腫瘤惡病質(zhì)的防治作用及其分子機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立腫瘤惡病質(zhì)動(dòng)物模型，觀察不同劑量MG132在不同給藥時(shí)間對(duì)腫瘤惡病質(zhì)小鼠的預(yù)防和治療作用，并對(duì)其作用的分子機(jī)制進(jìn)行初步探討，旨在為腫瘤惡病質(zhì)的防治提供新思路。
　　方法：
　　采用小鼠結(jié)腸癌26(Colon26)細(xì)胞株皮下接種BALB/c小鼠，建立腫瘤惡病質(zhì)動(dòng)物模型。88只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為8組:健康對(duì)照組（HC=8只）;腫瘤惡病質(zhì)組（CC=16只）;MG132預(yù)防低濃度組(PL=8

2、只)、中濃度組（PM=16只）、高濃度組（PH=8只）;MG132治療低濃度組（TL=8只）、中濃度組（TM=16只）、高濃度組（TH=8只）。取Colon26細(xì)胞0.1ml（約1×106個(gè)）接種于實(shí)驗(yàn)組（后7組）每只小鼠腋窩皮下，HC組注射等量生理鹽水。每天定時(shí)監(jiān)測(cè)各組小鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)、體重、攝食量和腫瘤體積。從第5天觸及腫瘤結(jié)節(jié)開(kāi)始，MG132預(yù)防的PL，PM和PH組小鼠每天分別腹腔注射三種不同濃度MG132，其余各組注射等量生理

3、鹽水。接種后第12天小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)期開(kāi)始，MG132治療的TL，TM和TH組小鼠開(kāi)始每天分別腹腔注射三種不同濃度MG132，其余各組小鼠維持原處理。第19天采集各組8只小鼠的血清、腓腸肌、附睪脂肪和腫瘤組織，CC組、PM組和TM組剩余8只小鼠分別原處理至死亡，記錄每只小鼠生存時(shí)間。采用自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)記錄每組小鼠1小時(shí)內(nèi)自發(fā)性活動(dòng)總路程;采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo);采用Image Pro Plus6.0軟件測(cè)量腓腸肌纖

4、維橫切面積;采用ELISA法檢測(cè)血清和腓腸肌中TNF-a和IL-6的水平;采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)腓腸肌和腫瘤組織中IKBa、P65、MAFbx和MuRF1的mRNA和蛋白表達(dá)水平;采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：
　　1一般情況
　　從接種Colon26后第5天開(kāi)始所有荷瘤小鼠皮下均可觸及腫瘤結(jié)節(jié)，接種后第12天，CC組、TL組、TM組和TH組小鼠出現(xiàn)體重明顯下降(P＜0.0

5、5)，自發(fā)性活動(dòng)顯著減少(P＜0.05)，并出現(xiàn)毛發(fā)變暗無(wú)光澤、虛弱、精神不振等癥狀，表明荷瘤小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)期，而PM組小鼠進(jìn)入惡病質(zhì)期時(shí)間明顯延后。接種后第19天，預(yù)防組和治療組小鼠惡病質(zhì)癥狀較CC組有改善，且以PM組改善最明顯。整個(gè)治療期間各組小鼠的攝食量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2體重和腫瘤組織
　　實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前各組小鼠間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與HC組比較，終末體重除PM組外均減輕(P＜0.05)，

6、終末去瘤體重各組荷瘤小鼠均減輕(P＜0.05);與CC組比較，MG132預(yù)防和治療組小鼠終末去瘤體重均增加(P＜0.05)，不同劑量組間分別以PM組和TM組最明顯，且PM組較TM組增加更明顯(P＜0.05)。與CC組比較，MG132預(yù)防和治療組小鼠終末腫瘤體積減小(P＜0.05)，腫瘤質(zhì)量減輕(P＜0.05)，不同劑量組間分別以PH組和TH組變化最明顯，且PH組較TH組減少明顯(P＜0.05)，同時(shí)PM組也較TM組減少明顯(P＜0.05

7、)。
　　3附睪脂肪和腓腸肌組織
　　與HC組比較，CC組小鼠附睪脂肪、腓腸肌質(zhì)量和腓腸肌橫切面積明顯縮小(P＜0.05)。與CC組，MG132預(yù)防與治療各組上述指標(biāo)明顯改善(P＜0.05);不同劑量間分別以PM組和TM組最明顯，且均為PM組較TM組改善更明顯(P＜0.05)。
　　4血清中生化指標(biāo)
　　與HC組比較，各組荷瘤小鼠Glu和ALB水平下降(P＜0.05)，TG水平升高(P＜0.05)，STP水平僅C

8、C組下降(P＜0.05)。與CC組比較，MG132預(yù)防和治療組Glu和ALB水平升高(P＜0.05)，TG水平降低(P＜0.05)，不同劑量間分別以PM組和TM組變化最明顯，且均為PM組優(yōu)于TM組(P＜0.05); MG132預(yù)防和治療組STP水平均升高(P＜0.05)，但PM組和TM組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5活動(dòng)量和生存時(shí)間
　　實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前各組小鼠1小時(shí)總路程無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與HC組比較，C

9、C組小鼠1小時(shí)總路程減少(P＜0.05);與CC組比較，MG132預(yù)防和治療組小鼠1小時(shí)總路程增加(P＜0.05)，不同劑量間分別以PM組和TM組最明顯，且PM組較TM組增加明顯(P＜0.05)。與CC組比較，MG132預(yù)防和治療組小鼠中位數(shù)生存時(shí)間延長(zhǎng)（分別是27、36、32天）(P＜0.05)，生存率提高(P＜0.05)，且PM組優(yōu)于TM組(P＜0.05)。
　　6血清和腓腸肌組織中炎性因子水平
　　與HC組比較，CC組

10、小鼠TNF-a和IL-6水平均顯著升高(P＜0.05)。與CC組比較，TM和PM組小鼠TNF a和IL-6水平均顯著降低(P＜0.05)，且PM組較TM組降低更明顯(P＜0.05)。
　　7腓腸肌和腫瘤中IκBα、P65、MuRF1和MAFbx的mRNA和蛋白水平
　　與HC組比較，CC組小鼠腓腸肌中IKBa的mRNA和蛋白水平顯著降低(P＜0.05)，P65、MAFbx和MuRF1水平顯著升高(P＜0.05)。與CC組比較

11、，PM和TM組小鼠腓腸肌中IKBa的水平顯著升高(P＜0.05)，P65、MAFbx和MuRF1水平顯著降低(P＜0.05)。與CC組比較， PM和TM組小鼠腫瘤組織中IKBa的水平顯著升高(P＜0.05)，P65水平顯著降低(P＜0.05)，但MAFbx和MuRF1的水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1隊(duì)LB/c小鼠接種Colon26細(xì)胞后可誘發(fā)典型腫瘤惡病質(zhì)綜合征，是研究腫瘤惡病質(zhì)的經(jīng)典動(dòng)物模型。