蛋白酶體抑制劑MG-132在誘導(dǎo)K562細(xì)胞株凋亡中的作用.pdf

1、目的:研究蛋白酶體抑制劑MG-132對(duì)人慢性粒細(xì)胞白血病急性紅白血病變細(xì)胞株K562的干預(yù)作用，為白血病的治療提供可靠的理論依據(jù)。
　　 方法:分組實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為等量培養(yǎng)基組（0μmol/L MG-132組），實(shí)驗(yàn)組按照不同劑量的MG-132分2、4、8、16、32μmol/L五個(gè)劑量組，各組再以24、48、72、96 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)不同劑量（0、2、4、8、16、

2、32μmol/L）的MG-132在不同時(shí)間（24、48、72、96 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)）對(duì)K562細(xì)胞株增殖的影響 ; 采用免疫細(xì)胞組織化學(xué)法檢測(cè)不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的MG-132在不同時(shí)間（24、48、72、96 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)）對(duì)K562細(xì)胞株中的核因子-KB(NF-KB)活性的影響。采用免疫細(xì)胞組織化學(xué)法檢測(cè)不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的MG-132在不同時(shí)間（24、48、72、96 h

3、四個(gè)時(shí)間點(diǎn)）對(duì)K562細(xì)胞株中的糖皮質(zhì)激素受體（GR）表達(dá)的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的MG-132在不同時(shí)間（24、48、72、96 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)）對(duì)K562細(xì)胞株凋亡的影響。
　　 結(jié)果: MTT：不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的 MG-132干預(yù)24、48、72、96 h后，K562細(xì)胞株的抑制率表現(xiàn)為對(duì)時(shí)間和劑量的依賴(lài)性，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，

4、以MG-132劑量為16μmol/L、干預(yù)72 h時(shí)，抑制率最高，為（63.33±1.52）％ 。免疫細(xì)胞組織化學(xué)法：不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的 MG-132干預(yù)24、48、72、96 h后，K562細(xì)胞株中的NF-KB的表達(dá)水平表現(xiàn)為對(duì)時(shí)間和劑量的依賴(lài)性，實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組，以MG-132劑量為32μmol/L、干預(yù)96 h時(shí)，NF-KB表達(dá)水平最低，為50.59±1.91。免疫細(xì)胞組織化學(xué)法：不同劑量（0

5、、2、4、8、16、32μmol/L）的 MG-132干預(yù)24、48、72、96 h后，K562細(xì)胞株中的GR表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，以MG-132劑量為16μmol/L、干預(yù)72 h時(shí)，GR的表達(dá)水平最高，為89.21±3.49。流式細(xì)胞術(shù)：不同劑量（0、2、4、8、16、32μmol/L）的 MG-132干預(yù)24、48、72、96 h后，K562細(xì)胞株的凋亡率表現(xiàn)為對(duì)時(shí)間和劑量的依賴(lài)性，實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，以MG-132劑

6、量為32μmol/L、干預(yù)48h時(shí)，凋亡率最高，為(21.37±2.02)％。
　　 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)條件下（1）MG-132可以抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)。（2）MG-132可以下調(diào)K562細(xì)胞中NF-KB的表達(dá)。（3）MG-132可以上調(diào)K562細(xì)胞中GR的表達(dá)。（4）MG-132可以誘導(dǎo)K562細(xì)胞的凋亡。（5）MG-132抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)NF-KB、上調(diào)GR的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，并表現(xiàn)出對(duì)時(shí)間和劑