SARS病人病房空氣污染和SARS病毒空氣分離株的基礎(chǔ)研究及其相關(guān)病毒數(shù)據(jù)庫(kù)的建立.pdf

1、SARS-CoV是一種新型的單鏈RNA人畜共患病病毒，該病毒主要通過(guò)近距離氣溶膠和親密接觸傳播，在家庭和醫(yī)院有顯著的聚集現(xiàn)象?？諝鈧鞑ジ腥臼芏喾N因素制約，其中最重要的是SARS-CoV在氣溶膠狀態(tài)下的存活力，以及環(huán)境的溫度、濕度、紫外線和空氣中各種化學(xué)污染物質(zhì)。 本研究旨在通過(guò)對(duì)SARS病人定點(diǎn)收治醫(yī)院(小湯山醫(yī)院、309醫(yī)院)室內(nèi)空氣SARS-CoV污染的研究，為更好地控制SARS-CoV的空氣傳播感染提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)采用F

2、A-Ⅱ型空氣微生物采樣器在醫(yī)院病房區(qū)、病房陽(yáng)臺(tái)、內(nèi)走廊、排風(fēng)扇和護(hù)士站五個(gè)地點(diǎn)持續(xù)采樣，之后進(jìn)行空氣樣本的洗脫、Vero-E6細(xì)胞培養(yǎng)、RT-PCR及序列測(cè)定。其結(jié)果病房區(qū)、病房陽(yáng)臺(tái)、內(nèi)走廊、排風(fēng)扇和清潔區(qū)五個(gè)地點(diǎn)均有SARS-CoVRNA的檢出，其中以小湯山醫(yī)院排氣口下風(fēng)向的陽(yáng)性率最高(58.3％)，護(hù)士站相對(duì)較低(25.0％)；從309醫(yī)院一名確診為SARS病人病房?jī)?nèi)的空氣樣本中分離出一株活性SARS-CoV(稱之為L(zhǎng)K309株)，

3、并穩(wěn)定傳代；與恢復(fù)期SARS病人血清免疫熒光染色陽(yáng)性，RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果顯示LK309株與已知SARS-CoV的同源性在98％以上。相關(guān)數(shù)據(jù)表明SARS病人定點(diǎn)收治醫(yī)院空氣中SARS-CoV的污染比較嚴(yán)重，急性后期的病人仍然從呼吸道大量排毒；但在病房室內(nèi)外的空氣中幾乎沒有檢測(cè)到活的SARS-CoV，初步評(píng)估認(rèn)為，SARS病人病房采取通風(fēng)和消毒的措施對(duì)降低室內(nèi)污染程度是非常有益的；而空氣消毒和環(huán)境因素對(duì)SARS病毒的存活有較大

4、的影響，故SARS病人病房排出的空氣對(duì)周邊環(huán)境造成的危害很小。 針對(duì)SARS-CoV空氣分離株LK309，根據(jù)引物步移法的原則，通過(guò)覆蓋全基因組的75對(duì)特異型引物對(duì)LK309株進(jìn)行全序測(cè)定。參考BJ01株、初次測(cè)序結(jié)果和驗(yàn)證結(jié)果重新得到了LK309的全基因組序列長(zhǎng)度為29，716bp，序列G+C平均含量為40.8％，共預(yù)測(cè)了14個(gè)CDS和三段非編碼區(qū)(5'-UTR“243bp”、3'-UTR“344bp”以及基因間區(qū)域“184b

5、p”)，所預(yù)測(cè)的基因編碼為“SARS-CoVgp”系列。3'端非編碼區(qū)的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，可形成冠狀病毒中高度保守的發(fā)卡型“偽結(jié)”，包括兩個(gè)可交互作用的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，可能在病毒入侵宿主的過(guò)程中起到重要作用。和其他17株病毒序列相比較，共有8個(gè)SNP位點(diǎn)，全部位于編碼區(qū)；通過(guò)CLUSTALW構(gòu)建進(jìn)化樹分析圖，與其它已知序列的同源率99.8％以上。應(yīng)用sequin軟件已向Genbank提交，AccessionNumber為AY595412。