棉酚誘導(dǎo)小鼠睪丸氧化應(yīng)激對NF-κB-P53信號通路影響的研究.pdf

1、棉酚是一種從棉籽中提取出來的一種多酚類化合物，由于具有抗炎、抗病毒、抗寄生蟲、抗腫瘤等作用越來越受人們的重視，同時棉酚也具有毒性作用，特別是生殖毒性，然而近幾年對于生殖毒性的研究甚少，因此我們研究了棉酚生殖毒性的分子作用機制。為了探究不同濃度棉酚對小鼠睪丸組織抗氧化酶活性的影響，及對相關(guān)凋亡蛋白NF-κB(P65)，P53，Caspase-3表達的影響，旨在進一步了解棉酚的生殖毒性作用機制。
　　本試驗將48只7周齡，體重為25.

2、53±1.45 g的成年小鼠隨機分成4組，每組12只，分為對照組:CG(1％ CMC-Na)、低劑量組:LG（40 mg·kg-1·d-1棉酚）、中劑量組:MG(80mg·kg-1·d-1棉酚)和高劑量組:HG（120 mg·kg-1·d-1棉酚），連續(xù)灌胃20d后處死，取睪丸稱重并計算臟器指數(shù)，睪丸組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量采用分光光度法測定，用熒光定量PCR方法分析睪丸組織NF-κB(P65)，P53，Caspase-

3、3 mRNA的表達水平。用western-blot方法分析睪丸組織NF-κB(P65)，P53，Caspase-3蛋白的表達水平。
　　試驗結(jié)果表明隨著灌胃天數(shù)的推移，CG和LG體重呈上升趨勢，MG和HG體重呈下降趨勢;與CG相比，各劑量組睪丸臟器指數(shù)均降低，MG極顯著降低(p＜0.01)，與LG相比，MG睪丸臟器指數(shù)極顯著降低(p＜0.01)，HG極顯著高于MG(p＜0.01)。隨著棉酚劑量的增加，與CG相比，MG和HG棉酚引起

4、SOD活性顯著降低(p＜0.05，p＜0.01)，GSH-Px活性極顯著降低(p＜0.01，p＜0.01)，MDA含量極顯著升高(p＜0.01，p＜0.01)。HG SOD活性極顯著低于LG(p＜0.01)。與MG對比，HG SOD活性極顯著降低(p＜0.01)。HG與LG對比，GSH-Px活性極顯著降低(p＜0.01)，與MG相比，HG GSH-Px活性顯著降低(p＜0.05)。與LG相比，MG和HG MDA含量極顯著增加(p＜0.0

5、1，p＜0.01)。與MG相比，HG MDA含量極顯著增加(p＜0.01)。
　　QRT-PCR結(jié)果表明，隨著棉酚劑量越大，小鼠睪丸組織NF-κB(P65) mRNA水平逐漸降低，P53和Caspase-3 mRNA水平逐漸升高。與CG相比，MG和HG NF-κB(P65) mRNA水平極顯著降低(p＜0.01，p＜0.01)，HG與LG相比，NF-κB(P65) mRNA水平極顯著降低(p＜0.01)。與MG相比，HG NF-κ

6、B(P65) mRNA水平顯著降低(p＜0.05)。與CG相比，HG P53 mRNA水平極顯著升高(p＜0.01)，MG與LG相比，P53 mRNA水平顯著升高(p＞0.05)，HG與LG相比，P53 mRNA水平極顯著升高(p＜0.01)。與MG相比，HG P53 mRNA水平極顯著升高(p＜0.01)。與CG相比，LG、MG和HG Caspase-3 mRNA水平極顯著升高(p＜0.01)。
　　Western blot分析

7、結(jié)果表明，與CG相比，MG、HG睪丸細胞核內(nèi)NF-κB(P65)蛋白水平極顯著降低(p＜0.01，p＜0.01)，HG引起總P53及核內(nèi)P53蛋白水平極顯著升高(p＜0.01，p＜0.01)，HG總P53(p＜0.01)及核內(nèi)P53蛋白(p＜0.01)水平與LG或MG相比極顯著升高。各劑量組棉酚引起Caspase-3水平極顯著升高(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.01)。同時MG與LG相比，核蛋白NF-κB(P65)表達水平極顯著降

8、低(p＜0.01)，HG與LG相比，核蛋白NF-κB(P65)表達水平極顯著降低(p＜0.01)。各劑量組兩兩相比全蛋白NF-κB(P65)表達水平差異不顯著(p＞0.05)。相關(guān)性分析結(jié)果表明SOD的活性與GSH-Px活性及P65 mRNA的表達呈正相關(guān)，與MDA含量和P53，Caspase-3mRNA的表達呈負相關(guān)。
　　因此棉酚能夠誘導(dǎo)小鼠睪丸氧化應(yīng)激，產(chǎn)生生殖毒性，這可能與阻礙NF-κB表達，增強P53和Caspase-3