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文檔簡介
1、研究背景:三氯乙烯(TCE)是一種用途廣泛的工業(yè)有機溶劑,在工業(yè)上作為脫脂劑、清洗劑和去污劑應(yīng)用廣泛。職業(yè)暴露三氯乙烯的工人出現(xiàn)三氯乙烯藥疹樣皮炎(DMLT)已經(jīng)成為國內(nèi)目前主要的職業(yè)衛(wèi)生問題之一,有關(guān)TCE引起危害的病例時有報道,患者的臨床表現(xiàn)主要是皮膚、肝臟、腎臟、神經(jīng)等系統(tǒng)的損害。目前國內(nèi)外相關(guān)研究主要在皮膚和肝臟等領(lǐng)域,對TCE引起腎臟損傷的作用機制研究較少,機制仍然不明。
研究目的:三氯乙烯皮膚致敏豚鼠后,根據(jù)不同時
2、點豚鼠腎臟組織病理和超微結(jié)構(gòu)改變,并結(jié)合腎功能和尿蛋白含量探討三氯乙烯及其代謝產(chǎn)物對腎臟的損傷效應(yīng),此外,結(jié)合抑制劑研究腎臟組織內(nèi)細(xì)胞因子和免疫復(fù)合物的沉積,利用免疫熒光、分子生物學(xué)技術(shù)探討三氯乙烯及其代謝產(chǎn)物引起腎臟組織損傷的作用機制。
研究方法:選用體重250~300g/只,白色雌性豚鼠,經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)一星期后,隨機分成空白對照組、溶劑對照組(橄欖油)、TCE組和2,4-二硝基氯苯(DNCB)對照組。采用豚鼠最大值試驗方法建
3、立豚鼠致敏模型,觀察并記錄豚鼠背部受試區(qū)的皮膚反應(yīng)情況;依據(jù)《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的皮膚反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)對豚鼠皮膚反應(yīng)進行評分;根據(jù)末次激發(fā)的不同時點對實驗動物進行分組,收集不同組別豚鼠的血液、尿液,腎臟組織利用組織病理、電鏡超微結(jié)構(gòu)改變、ELISA和組織生化指標(biāo)研究豚鼠致敏后三氯乙烯對腎臟的損傷效應(yīng)。另購買一批豚鼠應(yīng)用三種不同的抑制劑進行上述實驗,應(yīng)用組織病理、免疫組化,ELISA、分子生物學(xué)技術(shù)研究三種抑制劑對三氯乙烯致敏豚鼠
4、腎臟損傷的拮抗作用,進一步分析三氯乙烯及其代謝產(chǎn)物在豚鼠致敏后對腎臟損傷的作用機制。
結(jié)果:
1.致敏率在皮膚致敏反應(yīng)試驗中,空白組、溶劑對照組及TCE14d組未見紅斑或水腫,在TCE試驗組的26只動物中有17只出現(xiàn)紅斑水腫,致敏率為65.38%,DNCB實驗組全部出現(xiàn)紅斑或水腫。三種抑制劑實驗組的致敏率為39.3%。
2.病理學(xué)檢查結(jié)果HE染色和超微病理結(jié)果顯示,TCE致敏組腎小球毛細(xì)血管基底膜節(jié)段增厚或
5、者菲薄,足突部分融合,腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹、空泡變性,微絨毛萎縮,個別小管呈萎縮狀。NAC致敏組腎小管上皮細(xì)胞損傷不明顯,PDTC和C5致敏組腎小管有不同程度的損傷,但明顯低于TCE致敏組。
3.腎功能檢查結(jié)果溶劑對照組腎功能各指標(biāo)與空白組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);與溶劑對照組及TCE14d組相比,TCE致敏組兩個時點腎功能均明顯升高(P<0.05);與相應(yīng)時點DNCB對照組相比,TCE致敏72h組升高(P<
6、0.05),TCE致敏24h組高于未致敏24h組;PDTC致敏組、NAC致敏實驗組BUN含量與空白對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),C5抗體致敏組與空白組相比BUN含量無明顯變化,NAC致敏組、C5致敏組的Cr含量與空白對照組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
4.mALB檢測結(jié)果溶劑對照組與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);與溶劑對照組相比,TCE14d組、TCE致敏組及未致敏組豚鼠24小時尿液中mALB含量均明顯
7、升高(p<0.05);TCE致敏組尿液mALB含量與TCE14d組和TCE未致敏組相比,含量明顯升高(p<0.05);NAC、PDTC和C5抗體致敏組mALB含量與空白組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,PDTC致敏組與TCE致敏組的微量白蛋白含量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
5.α1-MG檢測結(jié)果溶劑對照組與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏組、未致敏組各時點均明顯升高,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);
8、與TCE14d組相比,TCE致敏組和未致敏組豚鼠尿液中α1-MG含量均明顯升高(p<0.05);PDTC致敏組與空白對照組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義,與TCE致敏組的微球蛋白含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義,NAC和C5抗體致敏組的微球蛋白含量與TCE致敏組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義,與空白對照組無差別。
6.β2-MG檢測結(jié)果溶劑對照組與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏組各時點均明顯升高(p<0.05);與TCE
9、14d組相比,TCE致敏組尿液中β2-MG含量均明顯升高(p<0.05);與TCE未致敏組相比,TCE致敏24h組豚鼠尿液中β2-MG含量明顯升高(p<0.05);NAC致敏組的微球蛋白含量與空白對照組相比有差異,PDTC和C5致敏組β2-MG含量與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
7.豚鼠組織勻漿IL-4、IFN-γ、TNF-α和C3含量的檢測TCE24h致敏組、TCE72h致敏組的IL-4、IFN-γ、TNF-α含量與溶劑對照
10、組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,TCE24h致敏組與未致敏組IL-4含量的差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,TCE72h致敏組的C3含量與溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。NAC和C5致敏組IL-4含量與對照組的差別無統(tǒng)計學(xué)意義,NAC、PDTC和C5抗體致敏組的IFN-γ與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,三種抑制劑致敏組TNF-α含量與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,NAC實驗組和C5實驗組C3與對照組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
8.豚鼠組織免疫組化方法檢測細(xì)
11、胞因子和補體的表達不同實驗組腎臟組織IL-4、IFN-γ、TNF-α、C5b-9和C3的表達相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,溶劑對組與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,TCE致敏組與溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,PDTC致敏組的C3含量與溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其余指標(biāo)無差異,NAC致敏組五種細(xì)胞因子的表達與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異,C5抗體致敏組TNF-α、C5b-9的表達與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義,其余指標(biāo)均有統(tǒng)計學(xué)差異。
12、r> 9.豚鼠組織TNF-α,MCP-1和C3mRNA水平檢測不同實驗組TNF-αmRNA含量與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),TCE致敏組與溶劑對照組、PDTC、NAC和C5致敏組TNF-αmRNA表達的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;各個實驗組MCP-1mRNA含量相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),TCE致敏組和C5致敏組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,PDTC干預(yù)實驗組和NAC干預(yù)實驗組的目的基因的表達與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義
13、;各個實驗組C3mRNA的表達與與溶劑對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
10.免疫熒光檢測腎臟組織NF-κB的活化TCE致敏組有大量活化的免疫熒光陽性細(xì)胞,溶劑對照組無陽性著色,PDTC致敏組和NAC致敏組活化的染色細(xì)胞核數(shù)量較少,C5抗體致敏組中有一定量活化的NF-κB,但明顯少于TCE致敏組。
11.MDA和SOD檢測結(jié)果溶劑對照組與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05);與溶劑對照組相比,TCE致敏24h組MD
14、A含量明顯上升(P<0.05);TCE致敏組與未致敏組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),PDTC致敏組和C5抗體致敏組的MDA含量也高于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,NAC致敏組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TCE致敏組SOD活性比溶劑對照組明顯降低(P<0.05);TCE致敏24h、72h組SOD活性較非致敏組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),PDTC致敏組和C5抗體致敏組的SOD活力低于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
15、結(jié)論:
1、采用豚鼠最大值試驗可以建立TCE致敏模型,本實驗條件下,TCE致敏率為65.38%,抑制劑實驗組致命率為39.3%。
2、TCE處理可造成豚鼠腎臟的病理性和功能性損傷;TCE對豚鼠腎臟的損害不局限于腎小球,還累及腎小管,且對腎小管的損害程度重于腎小球,PDTC、NAC和C5抑制劑實驗組腎小管損傷程度明顯減輕,但重于對照組。
3、TCE對腎臟的作用機制不同于DNCB,TCE不單純是致敏劑,也是免疫
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