三氯乙烯致敏豚鼠肝組織中細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平研究.pdf

1、目的：檢測并比較不同組豚鼠肝組織中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8表達水平，研究細胞因子在TCE致敏豚鼠肝損傷中的作用，探討三氯乙烯藥疹樣皮炎合并的肝損傷機制。
　　 方法：選用體重范圍為250 g左右白色雌性豚鼠45只，隨機分成空白對照組（5只）、溶劑對照組（5只）、TCE處理組（35只），依照豚鼠最大值實驗（guinea pig maximization test,GPMT）方法建立動物致敏模型，并在終末激發(fā)后依據(jù)致

2、敏結果以及取材時點不同（分別于終末激發(fā)后24h、72h取材），將TCE處理組分為TCE致敏24h組、72h組和TCE未致敏24h組、72h組。觀察和記錄受試區(qū)的皮膚反應情況并進行拍照，按表一對皮膚反應進行評分。抽取豚鼠血液并處死豚鼠，在無菌條件下迅速取下豚鼠肝臟，部分做成蠟塊，部分做組織勻漿。于自動生化分析儀上檢測肝功能，HE染色觀察病理學改變，免疫組織化學方法以及酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測豚鼠皮膚肝組織中TNF-α、IL-1、IL-6和IL

3、-8的表達水平，用 SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包對實驗結果進行統(tǒng)計分析。
　　 結果：
　　 1．在此次皮膚致敏反應試驗中，空白組和溶劑對照組均未見紅斑或水腫；TCE處理組的30只豚鼠中有19只出現(xiàn)紅斑，致敏率為63.3％。
　　 2．肝功能 TCE致敏組的ALT、AST水平較溶劑對照組升高，有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組ALT、AST水平顯著高于TCE致敏24h組以及TCE14d組，且有統(tǒng)計學

4、意義（p<0.05）；TCE致敏72h組ALB水平下降，與溶劑對照組比較有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 3．病理學觀察空白對照組、溶劑對照組豚鼠肝細胞排列整齊，胞質均勻，胞核大而圓，核仁明顯，核膜清晰；TCE未致敏組能偶見肝細胞水腫；TCE致敏24h組中能夠見到少量肝細胞水腫；TCE致敏72h組中能夠見到較多肝細胞水腫，呈空泡樣改變，并有胞核破裂消失。
　　 4．肝組織中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平

5、檢測4.1 TNF-α檢測結果免疫組化結果：TCE14d組、TCE致敏24h組、TCE致敏72h組TNF-α水平較溶劑對照組上升（p<0.05）；TCE致敏組肝組織中TNF-α水平分別高于各自未致敏組（p<0.05）；TCE致敏72h組肝組織中TNF-α水平要高于TCE致敏24h組以及TCE14d組（p<0.05）。ELISA結果：TCE未致敏24h組、TCE致敏組24h組、TCE未致敏72h組、TCE致敏72h組肝組織中TNF-α水平

6、高于溶劑對照組（p<0.05）；TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中TNF-α水平分別高于各自未致敏組（p<0.05）；TCE致敏72h組、TCE致敏24h組肝組織中TNF-α水平均高于TCE14d組水平p<0.05）。
　　 4.2 IL-1檢測結果免疫組化結果：與溶劑對照組比較，TCE致敏24h組、TCE致敏72h組以及TCE未致敏24h組肝組織中IL-1β水平升高（p<0.05）；TCE致敏組24h、TCE致敏7

7、2h組肝組織中IL-1β水平分別高于各自未至敏組（p<0.05）；TCEh致敏24組、TCE致敏72h組肝組織中IL-1β水平均高于T14d組（p<0.05）；而且，TCE致敏72h組肝組織中IL-1β水平要高于TCE致敏24h組（p<0.05）。ELISA結果：TCE處理的各組肝組織中IL-1水平較溶劑對照組都上升，除TCE未致敏72h組外，其它組有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組肝組織中IL-1水平高于TCE未致敏72

8、h組（p<0.05）；TCE致敏72h組肝組織中IL-1水平高于TCE致敏24h組、TCE14d組（p<0.05）。
　　 4.3 IL-6檢測結果免疫組化結果：TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-6水平較溶劑對照組升高（p<0.05）；TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-6水平分別高于各自未至敏組（p<0.05）；TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-6水平均高于T14d組（p<0

9、.05）。ELISA結果：TCE致敏組24h組、TCE未致敏72h組、TCE致敏72h組較溶劑對照組升高，差異且有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組肝組織中IL-6水平高于TCE未致敏72h組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組、TCE致敏24h組肝組織中IL-6水平均高于TCE14d組水平，其中TCE致敏72h組有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 4.4 IL-8檢測結果免疫組化結果：與溶劑對照

10、比較，TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-8水平升高（p<0.05）；TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-8水平分別高于各自未致敏組（p<0.05）；TCE致敏24h組、TCE致敏72h組肝組織中IL-8水平均高于T14d組（p<0.05）。ELISA結果：TCE處理的各組肝組織中IL-8水平都上升，且有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組肝組織中IL-8水平高于TCE未致敏72h組，差異有統(tǒng)計

11、學意義（p<0.05）；TCE致敏72h組、TCE致敏24h組肝組織中IL-8水平均高于TCE14d組水平，其中TCE致敏72h組有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 5．肝組織中細胞因子以及細胞因子與肝功能間相關性分析TNF-α與IL-1、IL-6、IL-8之間存在顯著正相關，即隨著肝組織中TNF-α水平的上升，肝組織中IL-1、IL-6、IL-8的表達也增加；IL-1與IL-6、IL-8之間也存在顯著正相關，但IL-6與IL

12、-8相關性無統(tǒng)計學意義。ALT、AST與TNF-α、IL-6呈正相關，且有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；除與TNF-α呈負相關有統(tǒng)計學意義（p<0.05），ALB與IL-1、IL-6、IL-8相關性無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：本研究證實TCE對豚鼠具有致敏作用；能夠引起致敏豚鼠不同程度的肝損傷；TCE致敏豚鼠肝組織內TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8水平較其它組高，且ALT、AST與TNF-α、IL-6呈正相關，提示TNF-