外翻腸囊法快速發(fā)現(xiàn)吳茱萸湯藥效成分群的研究.pdf

1、為了建立中藥復(fù)方的質(zhì)量控制方法，我們以吳茱萸湯為研究對(duì)象，在明確和積累單味藥主要成分的基礎(chǔ)上，建立復(fù)方藥效成分群快速發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)的方法，為質(zhì)量控制中選取控制指標(biāo)提供參考。
　　 吳茱萸湯出于《傷寒論》，是治療陽明寒嘔、少陰吐利、厥陰頭痛常用的經(jīng)典方，現(xiàn)代臨床仍應(yīng)用其治療多種疾病。本方由吳茱萸、生姜、人參、大棗組成。依據(jù)其臨床用藥習(xí)慣（以水煎劑入藥），推測其藥效成分主要應(yīng)集中于水溶性部位中。人參、生姜水溶性部位的主要化學(xué)成分已有研究

2、，而有關(guān)吳茱萸、大棗水溶性部位的化學(xué)成分研究尚未見報(bào)道。為便于闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)水溶性部位進(jìn)行了化學(xué)成分的研究。從吳茱萸水溶性部位分離得到7種成分，分別鑒定為檸檬黃素-3-O-β-葡萄糖苷（Lcs）、異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖（6”→1”’）-α-L-鼠李糖苷（Irs）、吳茱萸酰胺、去氫吳茱萸堿（Dhe）、吳茱萸次堿（Ru）、吳茱萸堿（Ev）、吳茱萸內(nèi)酯（檸檬苦素，Li）；兩個(gè)黃酮類成分為從本屬中首次分離。從大棗水溶性部位分離

3、得到8種成分，分別鑒定為對(duì)羥基-間甲氧基苯甲酸、東莨菪內(nèi)酯、酸棗仁皂苷B、齊墩果酸、槲皮素、無刺棗芐苷Ⅱ、蘆丁、胡蘿卜苷，其中對(duì)羥基-間甲氧基苯甲酸、東莨菪內(nèi)酯兩種成分為從本屬中首次分離，槲皮素、無刺棗芐苷Ⅱ、胡蘿卜苷三種成分為從本植物中首次分離。
　　 為確認(rèn)復(fù)方的藥效成分群，我們提出“復(fù)方成分群>>吸收成分群>藥效成分群”的假說。首先對(duì)吳茱萸湯吸收入血成分進(jìn)行研究。采用體內(nèi)模型法，大鼠口服給藥后不同時(shí)間在門靜脈取血，血樣采用

4、液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，吳茱萸湯吸收進(jìn)入血液的可確認(rèn)成分為Irs、Rg1、Rb1、Re、Li、6-Gi等7種；成分進(jìn)入血液的時(shí)間在給藥后30min-60min之間；Re、6-Gi、Rb1代謝較快。該結(jié)果為選擇吳茱萸湯質(zhì)量控制指標(biāo)提供了重要參考。
　　 對(duì)質(zhì)量控制工作者而言，通過體內(nèi)模型檢測吸收成分進(jìn)而尋找藥效成分，可能存在以下困難：藥物口服吸收量小，易受到體內(nèi)各種物質(zhì)的干擾而難以檢出；需要掌握一定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能；

5、需要精密和大型儀器，測試費(fèi)用高。為了建立一種快速、簡便的體外方法，我們隨后采用體外模型--外翻腸囊法進(jìn)行吳茱萸湯腸吸收的研究，并將其與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7種入血成分均可用HPLC在腸囊吸收液中檢出，Li、6-Gi和Rg1的吸收速度在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均較快，但成分體外進(jìn)入空腸時(shí)間比入血時(shí)間要晚約30min，說明兩種模型有很好的相關(guān)性，可以通過檢測外翻腸囊實(shí)驗(yàn)中空腸段60min-90min的樣品推測可能吸收入血的成分。外翻腸囊模型可為