外源性配體激動(dòng)Toll樣受體致小鼠重癥急性胰腺炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：重癥急性胰腺炎(SAP)是臨床上多見(jiàn)的危重疾病，一旦發(fā)生，無(wú)有效方法遏制其進(jìn)展，死亡率在20％～30％左右，國(guó)外報(bào)道達(dá)40％。目前人們已發(fā)現(xiàn)了許多與胰腺炎病程有關(guān)的因素，其中炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子等誘發(fā)的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度活化所引起的全身炎性反應(yīng)是一重要因素。SAP是一種全身性疾病，細(xì)胞因子和炎癥反應(yīng)失衡理論在SAP發(fā)病機(jī)制中的重要地位現(xiàn)已得到公認(rèn)。20世紀(jì)90年代提出了關(guān)于全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)發(fā)生機(jī)制

2、的“二次打擊”(two-hit)理論。對(duì)于SAP我們認(rèn)為：各種刺激構(gòu)成對(duì)機(jī)體第一次打擊形成急性水腫性胰腺炎(AEP)，而在一定時(shí)間內(nèi)以適當(dāng)?shù)牧砍霈F(xiàn)的各種類(lèi)型的抗原沖擊免疫系統(tǒng)構(gòu)成了二次打擊，引發(fā)了細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)形成SIRS，導(dǎo)致SAP的發(fā)生。Toll樣受體(TLR)是近年來(lái)在多種生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)介導(dǎo)固有免疫的細(xì)胞膜受體家族，它通過(guò)活化一系列與免疫相關(guān)的基因表達(dá)而發(fā)揮作用。有關(guān)TLR激活的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程主要來(lái)自對(duì)TLR2和TLR4的研

3、究。外源性配體激活TLR后，通過(guò)一系列復(fù)雜的的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致核因子-kappaB(NF-kB)激活，啟動(dòng)細(xì)胞因子釋放，最終形成SAP。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立SAP小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察小鼠AEP時(shí)不同時(shí)間LPS、BLP二次打擊小鼠SAP的發(fā)生、血清淀粉酶及細(xì)胞因子IL-1B的表達(dá)，來(lái)證實(shí)“急性水腫性胰腺炎+抗原二次打擊”產(chǎn)生SAP的理論。通過(guò)檢測(cè)胰腺組織TLR蛋白表達(dá)，來(lái)闡明TLR在SAP中的作用。 方法 選取BALB/C小鼠60只

4、，體重18-22g，隨機(jī)分成4組。1組為正常對(duì)照組，2組為雨蛙素AEP組，3組為脂多糖(LPS)組、4組為L(zhǎng)PS+脂蛋白(BLP)組，每組按時(shí)間不同分為a、b、c三個(gè)小組。采用雨蛙素腹腔注射制成AEP。分別于AEP形成后5、24、72小時(shí)注射LPS、LPS+BLP，注射后6小時(shí)取血液及胰腺標(biāo)本，檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清淀粉酶、IL-1B的表達(dá)。免疫組化SP法檢測(cè)小鼠胰腺TLR2、4蛋白表達(dá)。 結(jié)果 (1)血清淀粉酶、胰腺組

5、織學(xué)評(píng)分：1組與2組間、2組與3、4組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01．)，證明SAP模型建立成功。(2)血清IL-1B的表達(dá)：1組與2組間、2組與3、4組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，3組與4組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)2～4組各組內(nèi)比較，以AEP形成后24h時(shí)(b組)IL-1B表達(dá)最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)免疫組化SP法檢測(cè)小鼠胰腺TLR2、4蛋白表達(dá)(a組)，對(duì)TLR4表達(dá)做統(tǒng)