蛻皮甾酮對大鼠腦缺血后血管生成及神經(jīng)功能恢復的影響.pdf

1、缺血性腦血管病的發(fā)病率及致殘率均較高，嚴重危害人類健康。尋找對腦梗塞有療效的藥物，降低腦血管病的死亡率和致殘率，是目前國內(nèi)外學者共同關(guān)心的課題。研究發(fā)現(xiàn)，血管生成能促進損傷神經(jīng)功能恢復，與缺血性腦血管病的預后密切相關(guān)。治療性血管生成(Therapeuticangiogenesis，TAG)，即通過藥物、基因、干細胞或其他方法促使缺血組織在原有微血管基礎(chǔ)上形成新的毛細血管，并與原有的血管網(wǎng)相交匯以改善循環(huán)，這一方法的出現(xiàn)為缺血性腦血管病的

2、治療提供了很有希望的新途徑。血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是目前公認促血管生成作用活性最強且必需的生長因子，許多科學家正致力于尋找一種提高內(nèi)源性VEGF合成及分泌的藥物或方法來治療缺血性腦血管病。 蛻皮甾酮(ecdysterone，EDS)是一種昆蟲蛻皮活性的天然甾體化合物。大量研究表明，蛻皮甾酮具有抗氧化作用；能促進內(nèi)皮細胞增殖，保護內(nèi)皮細胞抵抗各種致傷因素的損傷，

3、有效抑制缺氧導致的內(nèi)皮細胞凋亡；促進心肌細胞和靜脈內(nèi)皮細胞VEGF的表達及神經(jīng)保護等多種藥理作用。蛻皮甾酮在循環(huán)系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的潛在應(yīng)用前景使我們推想：蛻皮甾酮可能對缺血性腦損傷有潛在的治療價值?相關(guān)研究尚未見國內(nèi)外報道。EDS在動植物界廣泛存在，我國是世界上第一個工業(yè)化大批量生產(chǎn)EDS的國家，相對于重組的VEGF蛋白或基因治療來說，易于獲取，成本低廉，對其醫(yī)用價值的研究有助于獲得盡早真正用于臨床的適合我國醫(yī)療現(xiàn)狀的治療手段。

4、 本課題將蛻皮甾酮應(yīng)用于腦缺血大鼠，研究其對腦缺血損傷后神經(jīng)功能恢復及血管生成、星形膠質(zhì)細胞活化的影響，初步探討其促血管生成作用的可能機制以及改善神經(jīng)功能恢復的可能途徑，豐富腦缺血后治療性血管生成的內(nèi)容，為進一步將其開發(fā)成為具有臨床應(yīng)用價值的缺血性腦血管病治療藥物提供一定的理論和實驗依據(jù)。 方法： 1.采用大腦中動脈線栓法建立大鼠局灶性腦缺血模型。 2.模型制備成功后，將動物隨機分為藥物干預組和缺血對照組，分別

5、腹腔注射蛻皮甾酮或等量溶劑，飼養(yǎng)至2天、7天、14天、21天處死。 3.觀察缺血后早期血清MDA含量、腦組織含水量、梗塞體積、死亡率。 4.通過免疫組織化學染色了解微血管密度、VEGF蛋白表達及星形膠質(zhì)細胞活化的情況，結(jié)合激光多普勒測定局部腦血流量，對血管生成及其作用機制進行了初步的探討。 5.采用神經(jīng)功能評分、SEP、MEP等檢測指標了解蛻皮甾酮對缺血后損傷神經(jīng)功能恢復的影響。 結(jié)果： 1.成功

6、建立了大鼠大腦中動脈供血區(qū)缺血梗死模型。 2.蛻皮甾酮干預組血清MDA含量、腦組織含水量、梗死體積百分比、死亡率均明顯低于單純?nèi)毖M。 3.免疫組化觀察腦缺血后VEGF蛋白表達在7天時最高，14天時已開始減少，21天時消失；主要分布于神經(jīng)元。干預組VEGF蛋白表達變化趨勢和缺血對照組一致，在7天和14天時表達均高于缺血對照組，7天時差異有顯著性。 4.FⅧ標記的微血管密度測定：大鼠腦缺血后周邊區(qū)微血管密度增高，7

7、天時最高，21天時略有下降。干預組在14天時最高，持續(xù)至21天仍在較高的水平；各觀察時相點均較對照組明顯增高，差異有顯著性。 5.局部腦血流量測定：缺血后14天測定缺血皮層rCBF，蛻皮甾酮干預組明顯高于缺血對照組，差異有顯著性。 6.GFAP免疫組化染色觀察星形膠質(zhì)細胞：大鼠腦缺血后GFAP陽性細胞數(shù)開始增多，染色加深，突起稍增粗和增多，呈活化的星形膠質(zhì)細胞形態(tài)。蛻皮甾酮干預組在各時相點GFAP陽性細胞數(shù)較單純?nèi)毖M增

8、加更明顯，染色加深，突起更多更長；GFAP免疫組化灰度值顯著低于缺血對照組，陽性細胞面積顯著高于缺血對照組。GFAP陽性細胞面積與MVD呈正相關(guān)。 7.NSS量表、SEP、MEP檢查結(jié)果，MCAo術(shù)后大鼠神經(jīng)功能明顯受損，自身有一定程度的恢復。蛻皮甾酮干預大鼠，各項檢查指標恢復更快，更明顯，但仍未完全恢復到正常水平。 結(jié)論： 1.蛻皮甾酮通過減輕氧自由基損傷，減輕腦水腫，減少了梗死體積及死亡率，對損傷的神經(jīng)細胞有

9、保護作用，延長了血運重建的治療時間窗。提示其在血管生成療法治療缺血性腦血管病的應(yīng)用中，具有較單純血管生成促進劑更優(yōu)越的應(yīng)用前景. 2.蛻皮甾酮具有確切的促進大鼠腦缺血周邊血管生成，增加局部腦血流量的作用；促進VEGF的表達可能是其作用機制之一； 3.蛻皮甾酮干預促進了腦缺血后星形膠質(zhì)細胞活化，可能與其促血管生成作用有關(guān)。 4.蛻皮甾酮具有多種藥理活性，參與腦缺血后各階段，促進了大鼠腦缺血后較長時期的神經(jīng)功能恢復，