?；撬徭V的抗心律失常作用機(jī)制及其安全性評(píng)價(jià).pdf

1、目的:觀察牛磺酸鎂配合物(taurinemagnesiumcoordinationcompound，TMCC)對(duì)各正常細(xì)胞離子通道以及缺氧/復(fù)氧損傷所致各異常離子通道的影響，評(píng)價(jià)TMCC對(duì)Nav1.5和HERG通道電流、通道動(dòng)力學(xué)以及通道蛋白的影響，以探討其抗心律失常作用機(jī)制及是否具有“致心律失?！弊饔?。
　　 方法:采用Langendorff逆行主動(dòng)脈灌注酶溶液消化法急性分離大鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞，制備缺氧/復(fù)氧模型。采用全細(xì)胞膜

2、片鉗技術(shù)，在電壓鉗模式下記錄低(100μmol·L-1)、中(200μmol·L-1)、高(400μmol·L-1)二個(gè)濃度的?；撬徭V及胺碘酮(24.24μmol·L-1)對(duì)正常及缺氧/復(fù)氧大鼠心室肌細(xì)胞INa、ICa,L、Ito、Ik1的影響。建立表達(dá)HERG和Nav1.5基因的HEK293細(xì)胞模型。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄INa和Ikr，觀察TMCC對(duì)INa和Ikr的影響并進(jìn)行通道動(dòng)力學(xué)研究。采用免疫蛋白印跡技術(shù)評(píng)價(jià)TMCC對(duì)Nav

3、1.5通道蛋白的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.TMCC（100，200，400μmol·L-1）和胺碘酮顯著性降低大鼠心室肌細(xì)胞INa電流密度峰值。TMCC和胺碘酮均使INa的電流-電壓曲線上移，但不改變其激活電位、峰值電位和反轉(zhuǎn)電位。TMCC和胺碘酮均使INa激活曲線右移，使激活減慢。TMCC及胺碘酮對(duì)INa失活曲線的影響是使之右移，失活減慢。
　　 2.TMCC(100，200，400μmol·L-1)使大

4、鼠心室肌細(xì)胞ICa,L電流密度發(fā)生顯著性變化，其中400μmol·L-1顯著升高鈣電流。胺碘酮作用后的電流密度峰值顯著性降低。400μmol·L-1TMCC使ICa,L的I-V曲線下移，100，200μmol·L-1TMCC對(duì)I-V曲線影響不明顯，胺碘酮?jiǎng)t使I-V曲線上移。TMCC使鈣通道激活曲線左移，激活加快;胺碘酮使曲線右移，激活減慢。TMCC使鈣通道失活曲線右移，失活減慢;胺碘酮使曲線左移，失活加快。
　　 3.TMCC(

5、100，200，400μmol·L-1)呈劑量依賴性地降低大鼠心室肌細(xì)胞Ito峰電流密度峰值。胺碘酮也顯著性的降低Ito峰電流密度。TMCC(100，200，400μmol·L-1)及胺碘酮均使Ito激活曲線右移，失活曲線左移。
　　 4.TMCC（100，200，400μmol·L-1）和胺碘酮對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞的IK1內(nèi)向及外向電流峰值均無顯著性影響。
　　 5.缺氧/復(fù)氧使大鼠心室肌細(xì)胞INa峰值顯著性降低，I-V曲

6、線上移。TMCC(200，400μmol·L-1)和胺碘酮可顯著性恢復(fù)缺氧/復(fù)氧損傷模型減小的INa峰值。TMCC和胺碘酮均可使上移的I-V曲線下移。與正常對(duì)照組相比，缺氧/復(fù)氧使鈉激活曲線右移，激活減慢，失活曲線左移，失活加快。TMCC(200，400μmol·L-1)及胺碘酮可恢復(fù)右移的失活曲線，使失活減慢，但對(duì)激活的影響無顯著性差異。
　　 6.缺氧/復(fù)氧使大鼠心室肌細(xì)胞ICa,L峰值顯著性增加，I-V曲線下移。TMCC(

7、200，400μmol·L-1)和胺碘酮可顯著性恢復(fù)缺氧/復(fù)氧損傷模型增大的ICa,L峰值。TMCC和胺碘酮均可使下移的I-V曲線上移。與正常對(duì)照組相比，缺氧/復(fù)氧使鈣激活曲線左移，激活加快，失活曲線右移，失活減慢。TMCC(200，400μmol·L-1)和胺碘酮可恢復(fù)左移的激活曲線，使激活減慢，恢復(fù)右移的失活曲線，使失活加快。
　　 7.缺氧/復(fù)氧使大鼠心肌細(xì)胞Ito峰值顯著性增加，I-V曲線上移。TMCC(200，400μ

8、mol·L-1)和胺碘酮可顯著性恢復(fù)缺氧/復(fù)氧損傷模型增大的Ito峰值。TMCC(200，400μmol·L-1)和胺碘酮均可使上移的曲線下移。與正常對(duì)照組相比，缺氧/復(fù)氧使Ito激活曲線左移，激活加快，對(duì)失活曲線的影響無顯著性差異。TMCC(200，400μmol·L-1)及胺碘酮可恢復(fù)左移的激活曲線，使激活減慢，對(duì)失活曲線的影響無顯著性差異。
　　 8.缺氧/復(fù)氧能使Ik1內(nèi)向電流峰值顯著性降低，內(nèi)向電流曲線上移，使Ik1外

9、向電流峰值顯著性降低，外向電流曲線下移。與缺氧/復(fù)氧組相比，TMCC(400μmol·L-1)和胺碘酮可顯著性恢復(fù)減小的內(nèi)向電流峰值。TMCC(400μmol·L-1)和胺碘酮可顯著性恢復(fù)減小的外向電流。
　　 9.在急性作用下，?；撬徭V對(duì)Nav1.5通道的峰電流INa具有濃度和電壓依賴性抑制作用，半數(shù)最大抑制濃度(IC50)為8.1±0.5μM。TMCC可以使得通道的激活曲線左移，加快通道的激活過程;使通道的失活曲線左移，加快

10、通道的失活過程;顯著減緩鈉電流從失活狀態(tài)的恢復(fù)速度。在各刺激頻率下，給予TMCC，第100次系列脈沖刺激時(shí)鈉電流并無顯著性差異。孵育24小時(shí)后，?；撬徭V并未抑制Nav1.5通道電流，也沒有使激活曲線、失活曲線以及失活后恢復(fù)曲線發(fā)生變化。在10Hz刺激頻率下，給予TMCC，第100次系列脈沖刺激時(shí)鈉電流有顯著性差異。(10，100和1000μM)TMCC均抑制Nav1.5通道蛋白，其中1000μMTMCC抑制作用的更顯著。
　　

11、10.當(dāng)TMCC為10mM，其對(duì)HERG尾電流的抑制率僅為18.43±0.12％。對(duì)濃度效應(yīng)曲線進(jìn)行擬合，得出半數(shù)最大抑制濃度(IC50)為16.9±1.1μM。
　　 結(jié)論:
　　 1.TMCC通過抑制鈉通道的激活和失活而濃度依賴性的抑制鈉電流。與胺碘酮相比對(duì)鈉通道的抑制作用要弱，表明TMCC是一種對(duì)鈉通道作用溫和的化合物。
　　 2.TMCC對(duì)鈣通道呈現(xiàn)雙相作用，即低濃度時(shí)抑制鈣內(nèi)流，而高濃度則促進(jìn)鈣內(nèi)流。高

12、濃度的TMCC可能通過促進(jìn)鈣通道的激活和抑制鈣通道的失活而促進(jìn)鈣離子內(nèi)流。
　　 3.TMCC通過抑制延遲整流鉀道的激活和促進(jìn)失活而濃度依賴性的抑制Ito。而胺碘酮對(duì)Ito的抑制作用更強(qiáng)。
　　 4.TMCC和胺碘酮對(duì)大鼠正常心室細(xì)胞的內(nèi)向整流鉀通道均無影響，表明TMCC不易出現(xiàn)導(dǎo)致心律失常的副作用。
　　 5.TMCC通過抑制鈉通道的失活過程來恢復(fù)缺氧/復(fù)氧損傷引起的INa峰值減小，使上移的I-V曲線下移，具有

13、濃度依賴性，但其對(duì)激活曲線無影響。
　　 6.TMCC通過促進(jìn)鈣通道的失活以及抑制鈣通道的激活過程來恢復(fù)缺氧/復(fù)氧損傷引起的ICa,L峰值增大，使下移的I-V曲線上移，具有濃度依賴性。
　　 7.TMCC可通過抑制鉀通道的激活過程對(duì)抗缺氧/復(fù)氧引起的Ito峰值增大，使上移的I-V曲線下移，且具有濃度依賴性，但其對(duì)失活曲線無影響。
　　 8.TMCC可恢復(fù)Ik1電流異常，從而抑制因缺氧/復(fù)氧誘發(fā)的Ik1電流變化，使

14、其恢復(fù)至正常水平，其作用與胺碘酮相當(dāng)。
　　 9.在急性作用時(shí)，TMCC對(duì)Nav1.5通道電流具有濃度依賴性和電壓依賴性的抑制，主要是通過結(jié)合到通道的激活態(tài)和失活態(tài)而發(fā)揮作用的。在慢性作用時(shí)，TMCC并未抑制Nav1.5通道電流，也不影響通道動(dòng)力學(xué)，但是對(duì)Nav1.5通道的作用具有一定的使用依賴性。TMCC對(duì)Nav1.5蛋白的作用是抑制合成后的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜上，其中高濃度的牛磺酸鎂抑制蛋白表達(dá)作用更明顯。
　　 10.