TLR3及相關(guān)免疫細(xì)胞與HBV宮內(nèi)傳播的關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　 ①探討TLR3在HBsAg陽性母親新生兒HBV宮內(nèi)傳播中可能的作用。
　　 ②探討HBsAg陽性母親新生兒的TLR3相關(guān)免疫細(xì)胞與HBV宮內(nèi)傳播的關(guān)系。
　　 ③了解發(fā)生HBV宮內(nèi)傳播新生兒的免疫狀況。
　　 方法:
　　 ①從2011年7月至2013年1月連續(xù)收集320例太原市第三人民醫(yī)院婦產(chǎn)科HBsAg陽性孕婦及其新生兒作為研究對象，通過問卷調(diào)查收集母親及新生兒一般人口學(xué)資料及相

2、關(guān)流行病學(xué)資料。
　　 ②HBsAg陽性孕婦分娩的新生兒24小時內(nèi)股靜脈非抗凝血和抗凝血各3ml。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測定母親及新生兒出生24小時內(nèi)外周血HBV血清標(biāo)志物，實時熒光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR)測定母親及新生兒外周血HBVDNA含量。
　　 ③部分

3、新生兒股靜脈抗凝血密度梯度離心分離PBMC后，運用多色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測TLR3蛋白含量;剩余的抗凝血用于檢測樹突狀細(xì)胞(DC)、B細(xì)胞、CD4+CD25+Treg和T淋巴細(xì)胞亞群的相對比例，分析TLR3蛋白含量以及相關(guān)免疫細(xì)胞與HBV宮內(nèi)傳播的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 ①320例HBsAg陽性母親分娩的新生兒中HBV宮內(nèi)傳播45例，僅HBsAg陽性者39例，HBsAg和HBV DNA均陽性者6例，HBV宮內(nèi)傳播

4、率為14.06％(45/320)。
　　 ②基線資料一般情況分析:HBV宮內(nèi)傳播組中，HBsAg陽性孕婦平均年齡（25.09±3.44）歲，平均孕周為（39.37±1.16）周;新生兒出生平均體重（3307.11±410.13）g;新生兒出生平均身高（50.19±1.81）cm;出生男女性別比例為1∶1.14(21∶24);陰道產(chǎn)與剖宮產(chǎn)分娩方式比例為1∶4.63(8∶37);以HBV DNA載量＜500copies/ml為陰性

5、，HBVDNA值＞107copies/ml為高載量，HBV DNA值≤107copies/ml為低載量，11例陰性，25例高載量，9例低載量。
　　 HBV非宮內(nèi)傳播組中，HBsAg陽性孕婦平均年齡（27.27±3.60）歲，平均孕周為（39.31±1.12）周;新生兒出生平均體重（3395.18±423.50）g;新生兒出生平均身高（50.07±1.39）cm;新生兒男性149人，女性為127人，出生男女性別比例為1∶1.17

6、;陰道產(chǎn)新生兒為146人，剖宮產(chǎn)為130人，陰道產(chǎn)與剖宮產(chǎn)分娩方式比例為1∶1.12;165例HBV DNA陰性，72例HBV DNA高載量，9例HBV DNA低載量。經(jīng)t檢驗分析，HBV宮內(nèi)傳播組和非宮內(nèi)傳播組間孕婦的年齡差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.895，P＜0.001），經(jīng)x2檢驗分析，新生兒HBV宮內(nèi)傳播與HBsAg陽性母親分娩方式差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=24.439，P＜0.001);而兩組之間HBsAg陽性孕婦孕期及新生兒性

7、別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 ③HBsAg陽性孕婦HBV的感染狀態(tài)與HBV宮內(nèi)傳播關(guān)系分析，HBsAg陽性孕婦根據(jù)HBsAg滴度水平不同，新生兒發(fā)生宮內(nèi)傳播率之間存在顯著性差異(P＜0.001)，當(dāng)母親HBsAg滴度水平低于3000ng/mL時，宮內(nèi)傳播的發(fā)生率為22.0％(37/168)，HBsAg滴度水平高于3000ng/mL時，新生兒宮內(nèi)傳播率為5.3％(8/152);HBsAg(+)HBeAg(-)孕婦新生

8、兒宮內(nèi)傳播率為7.0％，HBsAg(+)HBeAg(+)孕婦隨著HBeAg滴度水平升高，新生兒宮內(nèi)傳播率增高到22.3％（P＜0.001）;HBsAg(+)抗-HBe(+)孕婦新生兒宮內(nèi)傳播率為24％，遠(yuǎn)高于HBsAg(+)抗-HBe(-)孕婦(P＜0.001);HBV DNA＞105copies/ml孕婦新生兒宮內(nèi)傳播率為26.3％，遠(yuǎn)高于HBV DNA為103-105copies/ml孕婦和HBsAg(+)HBV DNA（-）孕婦(

9、P＜0.001);HBsAg(+)孕婦的抗-HBs和抗-HBc滴度與HBV宮內(nèi)傳播無統(tǒng)計學(xué)聯(lián)系（P＞0.05）。
　　 ④HBsAg陽性孕婦新生兒HBV宮內(nèi)傳播多因素分析結(jié)果顯示母親HBeAg水平(OR=1.001，95％ CI:1.001～1.002)和孕婦年齡(OR=0.840，95％ CI:0.757～0.934)對HBV宮內(nèi)傳播有影響。
　　 ⑤HBsAg陽性母親分娩新生兒TLR3測定分析，宮內(nèi)傳播組新生兒TLR

10、3平均熒光強度為(27.66±11.89)％，高于非宮內(nèi)傳播組新生兒（20.06±8.59）％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.155，P=0.877)。
　　 ⑥HBsAg陽性母親分娩新生兒DC細(xì)胞測定分析，非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血mDC細(xì)胞中比例為(1.09±1.16)％，高于宮內(nèi)傳播組新生兒（0.95±0.65）％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.544，P=0.587);非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血pDC細(xì)胞中比例為（0.77±0

11、.94）％，高于宮內(nèi)傳播組新生兒(0.70±0.62)％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.335，P=0.778);
　　 ⑦HBsAg陽性母親分娩新生兒B細(xì)胞表達(dá)測定分析，非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血B細(xì)胞比例為（6.91±4.49）％，高于宮內(nèi)傳播組新生兒（6.86±4.30）％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.057，P=0.954)。
　　 ⑧HBsAg陽性母親分娩新生兒T細(xì)胞亞群表達(dá)測定分析，宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD

12、3+T淋巴細(xì)胞比例為(60.28±14.50)％、CD4+T淋巴細(xì)胞比例為(42.26±11.02)％、CD8+T淋巴細(xì)胞比例為(15.27±5.93)％，高于非宮內(nèi)傳播組新生兒CD3+T淋巴細(xì)胞比例(58.52±16.23)％、CD4+T淋巴細(xì)胞比例(39.92±14.52)％、CD8+T淋巴細(xì)胞比例(15.27±5.93)％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.478，P=0.662;t=0.804，P=0.442;t=0.350，P=0.7

13、27);宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+/CD8+為(3.44±1.68)，低于非宮內(nèi)傳播組新生兒(3.34±1.92)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.203，P=0.839)。
　　 ⑨HBsAg陽性母親分娩新生兒CD4+CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)測定分析，宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+CD25+FOXP3+Treg比例為（4.62±4.19）％，非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+CD25+FOXP3+Treg比例為(11.79

14、±14.25)％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.638，P=0.525);宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+FOXP3+Treg比例為（4.22±2.28）％，非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+FOXP3+Treg比例為（4.64±5.59）％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.339，P=0.735);宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+CD25+Treg比例為(10.01±5.05)％，非宮內(nèi)傳播組新生兒股靜脈血CD4+CD25+Treg比例為(

15、11.79±14.25)％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.568，P=0.570);
　　 結(jié)論:
　　 ①本次研究發(fā)現(xiàn)HBsAg陽性孕婦的年齡及HBeAg滴度值水平對新生兒發(fā)生HBV宮內(nèi)傳播有影響。
　　 ②宮內(nèi)傳播組新生兒TLR3蛋白含量高于非宮內(nèi)傳播組新生兒，可能由于宮內(nèi)傳播組新生兒由于受到HBV的刺激TLR3蛋白含量升高，TLR3蛋白可能在HBV宮內(nèi)傳播發(fā)生機制中有重要作用。
　　 ③非宮內(nèi)傳播組新

16、生兒股靜脈血B細(xì)胞相對比例高于宮內(nèi)傳播組新生兒，HBsAg陽性母親分娩新生兒體液免疫可能與HBV宮內(nèi)傳播發(fā)生有關(guān)。
　　 ④非宮內(nèi)傳播組的mDC細(xì)胞、pDC細(xì)胞相對比例高于宮內(nèi)傳播組，提示HBsAg陽性母親分娩新生兒股靜脈血中DC可能與HBV宮內(nèi)傳播發(fā)生有關(guān)。
　　 ⑤宮內(nèi)傳播組新生兒CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞相對比例及CD4+/CD8+T細(xì)胞亞群比值高于非宮內(nèi)傳播組新生兒。宮內(nèi)傳播組新生兒可能在HBV感染時