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1、為了探討chTLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在傳染性法氏囊病病毒(IBDV)致雛雞法氏囊免疫損傷機(jī)制中的作用,本試驗(yàn)將75只SPF雛雞隨機(jī)分為3組,每組25只,分別為感染組、疫苗組和對(duì)照組。嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)。感染組雛雞經(jīng)點(diǎn)眼滴鼻途徑,感染IBDV標(biāo)準(zhǔn)毒株,0.6ml/只。疫苗組經(jīng)相同途徑給予雛雞IBDV活疫苗,2羽份/只。對(duì)照組經(jīng)相同途徑給予PBS,0.6ml/只。于感染后第1、4、7、21及35天每組隨機(jī)抽取5只雛雞心臟采血處死,快速采取法氏囊于-8
2、0℃保存。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)法氏囊中的chTLR3、chTLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號(hào)分子(chMyD88、chTRIF和chNF-κB)及細(xì)胞因子(chTNF-α、chIL-1β、chIL-6、chIFN-β)的mRNA表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè);采用間接免疫熒光技術(shù)對(duì)法氏囊中的chTLR3蛋白表達(dá)以及T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)量變化進(jìn)行檢測(cè)。
結(jié)果發(fā)現(xiàn),感染組與疫苗組雛雞法氏囊中chTLR3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量及其蛋白表達(dá)
3、量在感染IBDV或接種IBDV活疫苗后均呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢(shì),并于第4天達(dá)到峰值(P<0.01或P<0.05)。表明chTLR3參與IBDV感染雛雞的過(guò)程。感染組雛雞法氏囊中的chTLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號(hào)分子的相對(duì)表達(dá)量在感染初期均顯著高于對(duì)照組(P<0.01或P<0.05),并皆于第4天達(dá)到峰值,之后逐漸下降。其中,chMyD88與chTRIF相比上調(diào)的幅度小、時(shí)間短,表明chTLR3主要接頭蛋白分子為chTRIF。感染組及疫苗
4、組雛雞法氏囊中細(xì)胞因子的表達(dá)趨勢(shì)與chTLR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)信號(hào)分子基本一致,即呈現(xiàn)先上調(diào)后下降的規(guī)律。
適應(yīng)性免疫相關(guān)指標(biāo)結(jié)果顯示,感染組雛雞感染IBDV后第1-7d,法氏囊中T淋巴細(xì)胞數(shù)量逐漸增加且極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),但于第21天顯著低于對(duì)照組(P<0.05),第35天雖有所上升但仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05);疫苗組雛雞接種IBDV疫苗后法氏囊中T淋巴細(xì)胞數(shù)量于接種后第1天開始上升,第4天達(dá)到峰值(P<
5、0.05),之后逐漸下降,于第21天恢復(fù)正常(P>0.05)。結(jié)果顯示,感染初期細(xì)胞因子相對(duì)表達(dá)量與T淋巴細(xì)胞數(shù)量均呈上升趨勢(shì)。感染組雛雞法氏囊中B淋巴細(xì)胞數(shù)量在感染IBDV后第1天便極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)并逐漸降低,第21天雖有所升高但仍然極顯著低于對(duì)照組(P<0.01),之后逐漸恢復(fù);疫苗組雛雞法氏囊B淋巴細(xì)胞數(shù)量在接種后第1-7d均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),但整體呈現(xiàn)逐漸升高狀態(tài)。結(jié)果顯示,在感染后期細(xì)胞因子(IF
6、N-β除外)相對(duì)表達(dá)量與B淋巴細(xì)胞數(shù)量均呈上升趨勢(shì)。上述結(jié)果表明,chTLR3可通過(guò)下游細(xì)胞因子在感染早期參與誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的發(fā)生,在感染晚期參與誘導(dǎo)體液免疫的發(fā)生。
另外,感染組雛雞巨噬細(xì)胞數(shù)量在感染后第1-7d顯著高于對(duì)照組(P<0.01或P<0.05),第21天顯著低于對(duì)照組(P<0.05),第35天恢復(fù)。疫苗組雛雞巨噬細(xì)胞數(shù)量呈先升高后降低趨勢(shì),于接種后第7天恢復(fù)。結(jié)果顯示,chTLR3相對(duì)表達(dá)量與巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞數(shù)
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