烏司他丁通過(guò)CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療熱射病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:熱射病(HS)是機(jī)體暴露在高溫高濕環(huán)境中核心體溫迅速升高(＞40℃)伴中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為主要特征的致命性急癥，病死率高達(dá)60％～90％，發(fā)病后迅速出現(xiàn)全身炎性反應(yīng)綜合征（SIRS）及多器官功能障礙(MODS)。CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)是機(jī)體重要的免疫抑制細(xì)胞，可調(diào)控免疫介導(dǎo)的全身炎性反應(yīng)。但是Tregs在HS全身炎性反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用未見報(bào)道。烏司他丁(UTI)是一種蛋白酶抑制劑，具有抗炎和免疫調(diào)

2、節(jié)作用，是治療全身炎性反應(yīng)的常用藥物，能夠降低SIRS患者外周血Tregs表達(dá)，改善免疫功能。然而，UTI對(duì)HS的干預(yù)效應(yīng)及其相關(guān)機(jī)制尚不明確。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在研究Tregs在HS全身炎性反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用，探討UTI對(duì)HS大鼠的治療效果及其可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用UTI治療HS提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分，將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為Control組和HS組，每組按發(fā)病后6h、12h、24h、48h、72h取

3、樣時(shí)間點(diǎn)分5個(gè)亞組(n=10)。建立HS大鼠模型。檢測(cè)各亞組大鼠生化指標(biāo)(AST、ALT)及血清細(xì)胞因子(TNF-α、IL-2、IL-6、TGF-β、IL-10);HE染色觀察肝組織6h、24h、72h病理改變。記錄各組大鼠72h生存率。
　　第二部分，通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)亞組大鼠外周血、脾臟組織Tregs比例及脾臟組織Tregs凋亡率，觀察其變化情況。
　　第三部分，將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為Control組、HS組和U

4、TI-HS組，各大組按發(fā)病后6h、12h、24h、48h、72h取樣時(shí)間點(diǎn)再分為5個(gè)亞組(n=10)。UTI-HS組大鼠在造模成功后經(jīng)腹腔注射UTI干預(yù)治療HS大鼠，于各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)大鼠生化指標(biāo)(AST、ALT)及血細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10，觀察6h、24h、72h肝組織形態(tài)學(xué)改變，并記錄72h生存率。流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)各亞組大鼠血、脾Tregs計(jì)數(shù)及其凋亡率。
　　結(jié)果:
　　第一部分，

5、成功建立了大鼠HS模型。血清細(xì)胞因子、生化指標(biāo)、肝組織病理及72h生存率改變均符合HS的表現(xiàn)特征，與HS病情嚴(yán)重程度具有良好的一致性。表現(xiàn)為:(1) HS組大鼠血清中細(xì)胞因子水平在各時(shí)間點(diǎn)顯著高于對(duì)照組。促炎因子TNF-α、IL-2、IL-6水平24h前顯著升高，24h后開始下降;抗炎因子TGF-β、IL-10隨時(shí)間推移逐漸升高;(2) HS大鼠肝功能指標(biāo)AST、ALT在各時(shí)間點(diǎn)較Control組顯著升高，且隨病情發(fā)展不斷升高;(3)

6、HS組大鼠發(fā)病后其肝組織病理?yè)p傷隨病情進(jìn)展逐漸加重。
　　第二部分，發(fā)現(xiàn)HS組外周血、脾臟組織Treg比例較Control先降低后升高，且隨病情進(jìn)展呈進(jìn)行性升高;脾臟組織Treg凋亡率早期增加，于24h后顯著減少，且隨時(shí)間推移逐漸減少，與Tregs變化呈負(fù)相關(guān)。
　　第三部分，發(fā)現(xiàn)與HS組比較，UTI干預(yù)組大鼠血清炎性因子水平、生化指標(biāo)(AST、ALT)顯著降低，72h生存率提高，肝組織病理明顯改善。UTI干預(yù)后，HS大鼠早

7、期脾臟Tregs凋亡減少，外周血、脾組織Tregs比例較HS組大鼠相對(duì)增加;24h后脾臟Tregs凋亡增加，Tregs比例明顯低于HS組。
　　結(jié)論:
　　(1)細(xì)胞因子(TNF-α、IL-2、IL-6、TGF-β、IL-10)、生化指標(biāo)(AST、ALT)、肝組織病理變化及大鼠72h生存率能夠客觀反應(yīng)HS病情的嚴(yán)重程度。24h可作為HS大鼠過(guò)度促炎反應(yīng)和抗炎反應(yīng)的時(shí)間分界點(diǎn);
　　(2) Tregs可能參與了HS的炎性