納米細菌與Ⅲ型前列腺炎以及前列腺結石發(fā)病關系的實驗研究.pdf

1、背景及目的： Ⅲ型前列腺炎(CPPS)是臨床上最常見的慢性前列腺炎，迄今病因不清，治療極其困難。一直以來，人們主要對其感染外的病因進行了探索并提出了多種假說，但均不能完全解釋該病的臨床特點。鈣化灶的存在以及抗生素治療常常療效明顯，啟示我們可能有不被常規(guī)檢查方法發(fā)現的感染物存在。 CPPS患者前列腺中經常出現結石，這種前列腺結石是在前列腺腺泡和腺管內形成的真性結石，它形成的原因現在還不很明了，可能與前列腺腺泡和排泄管慢性炎

2、癥、促或抑成核因子的作用、鈣離子濃度等因素有關。在前列腺結石的形成中是否有不為我們認知的感染性病因存在同樣值得我們探索。 而納米細菌(nanobacteria)的發(fā)現和該細菌本身獨特的致病特點為闡明CPPS和前列腺結石的病因提供了一條嶄新的思路。 納米細菌是新發(fā)現的納米級(50～200nm)球菌，在普通的微生物培養(yǎng)條件下不能生長。它能感染人體內多種細胞，導致被感染細胞發(fā)生骨骼外鈣化(病理性鈣化)，同時釋放毒素引起組織炎癥

3、。該發(fā)現為Ⅲ型前列腺炎和前列腺結石發(fā)生機制研究提供了全新的切入點，現未見有相關文獻報道，值得研究。通過研究，有望證實納米細菌在CPPS和前列腺結石中的病因作用，并為從清除納米細菌入手來治療CPPS和前列腺結石提供理論依據。 方法： 本研究擬從大樣本Ⅲ型前列腺炎分泌液和前列腺結石中分離培養(yǎng)納米細菌，并采用間接免疫熒光、鈣染色、電鏡觀察、16srRNA基因擴增及測序等方法對可疑培養(yǎng)物進行鑒定，研究納米細菌在CPPS和前列腺結

4、石中的病因作用，為臨床治療提供新的病原學依據。 結果： 1、標本培養(yǎng)3-4周后觀察發(fā)現部分培養(yǎng)管底部出現緊貼管壁生長的白色沉淀。 2、單克隆抗體間接免疫熒光染色對納米細菌進行鑒定，結果發(fā)現CPPS患者組中29例前列腺液標本中存在著納米細菌，陽性率為58％；而正常對照組中的前列腺液標本僅有2例存在納米細菌，陽性率為4％。二者差異有統(tǒng)計學意義(x2=34.08P＜0.01)。 3、單克隆抗體間接免疫熒光染色對

5、納米細菌進行鑒定，結果發(fā)現26例結石標本中有納米細菌存在，陽性率為65.0％。其中Ⅰ+Ⅳ組中6例有有納米細菌存在，陽性率為37.5％；Ⅱ+Ⅲ組中20例有納米細菌存在，陽性率為83.3％。兩者間差異有統(tǒng)計學意義(x2=8.86P＜0.01)。 4、透射電鏡下觀察，納米細菌呈球狀或球棒狀，大小約100～500nm，絕大多數聚集成簇，菌體周圍有一層黑色的物質包繞，并有羥基磷灰石分布；掃描電鏡下觀察，納米細菌成簇生長，形態(tài)呈不規(guī)則球形，

6、直徑200-800nm。 5、茜素紅染色觀察結果：細菌絕大多數聚集成簇，個體極其微小。 6、特異性片段的測序結果經軟件與納米細菌16sRNA序列進行比較后發(fā)現相似度為98％：Score=2480bits(1290)，Expect=0.0，Identities=1387/1409(98％)，Gaps=4/1409(0％)，Strand=Plus/Plus。 結論及展望： 1、采用單克隆抗體間接免疫熒光染色對

7、納米細菌進行鑒定，結果發(fā)現CPPS患者組中納米細菌陽性率為58％；而正常對照組中的納米細菌陽性率為4％。二者差異有統(tǒng)計學意義(x2=34.08P＜0.01)。表明Ⅲ型前列腺炎的發(fā)病與納米細菌的感染存在著密切的關系。 2、采用單克隆抗體間接免疫熒光染色對納米細菌進行鑒定，結果發(fā)現有26例前列腺結石標本中存在著納米細菌，陽性率為65％。表明前列腺結石的發(fā)病與納米細菌的感染也存在著密切的關系。 3、在CPPS患者的前列腺液和前

8、列腺結石中提取出納米細菌的核酸成分，并與基因庫中納米細菌16SrRNA基因序列進行比對，鑒定出納米細菌16SrRNA基因，為納米細菌在CPPS和前列腺結石發(fā)病中起重要作用提供進一步的佐證。 4、納米細菌的培養(yǎng)周期很長，用形態(tài)學來進行鑒定耗時長，而通過PCR法、T載體克隆和測序等手段鑒定納米細菌的16SrRNA基因就比較簡便，這就為納米細菌的鑒定提供了一條快速的檢測途徑，同時為研究納米細菌的礦化基因提供了一個研究基礎。 5