肝細(xì)胞肝癌乙肝病毒基因整合位點(diǎn)及臨床病理分析.pdf

1、目的：探討乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)在肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)染色體上的整合規(guī)律及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。
　　方法：收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科2011年1月~2012年2月共40例HBsAg陽(yáng)性HCC患者圍手術(shù)期的一般臨床資料和病理學(xué)資料,并進(jìn)行術(shù)后隨訪。以40例HCC組織的DNA為模板,HBV X基因上游序列和人類基因組Alu重復(fù)序列為引物

2、,應(yīng)用巢式PCR原理,擴(kuò)增出HBV X基因及其側(cè)翼的人基因組DNA片段。PCR產(chǎn)物進(jìn)行全自動(dòng)測(cè)序。所獲結(jié)果經(jīng)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)BLAST及Mapviwer檢索確認(rèn)HBV整合在染色體上的精確位置。結(jié)合臨床病理參數(shù)及隨訪資料分析HBV DNA整合對(duì)HCC患者的影響。應(yīng)用Kaplan-Meier分析HBV DNA整合組以及未整合組患者術(shù)后的無(wú)瘤生存率及總體生存率。Cox回歸單因素及多因素分析影響HCC患者術(shù)后生存的因素。

3、r>　　結(jié)果：40份HCC組織中,18例存在HBV整合現(xiàn)象,另22份標(biāo)本未檢測(cè)到有整合。整合的標(biāo)本中15例正向插入宿主基因,7例反向插入宿主基因,其中4例既有正向插入,又有反向插入,2例有兩個(gè)HBV整合位點(diǎn)。其中4個(gè)基因(homo sapiens telomerase reverse transcriptase、mixed-lineage leukemia4、cyclin E1和SUMO specific protease5)發(fā)現(xiàn)被HB

4、V重復(fù)整合,從病毒基因分析,整合可發(fā)生于X基因的任意長(zhǎng)度,且均以截短方式插入宿主細(xì)胞DNA。HBV整合與HCC患者在性別、年齡、AFP、鏡下癌栓、脈管侵犯、包膜、子灶及復(fù)發(fā)等方面無(wú)關(guān)(P>0.05);而與HBeAg陽(yáng)性、HBV DNA水平、腫瘤大小、分化程度呈正相關(guān)(P<0.05)。全組病例隨訪時(shí)間3月~35月,平均17.2±7.6月,整合組平均總體生存時(shí)間為低于未整合組(14.0±5.8月 vs19.8±8.1月),整合組1、3年總體

5、生存率低于未整合組(77.7％vs86.4%、72.2%vs81.8%),1、3年無(wú)瘤生存率亦低于未整合組(66.7% vs86.4%、55.6% vs63.6%),均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：HBV在HCC細(xì)胞染色體上存在整合且為不均衡分布。HBV整合與HCC患者HBeAg陽(yáng)性、HBV DNA水平、腫瘤大小以及分化程度呈正相關(guān),且影響HCC患者術(shù)后總體生存時(shí)間、無(wú)瘤生存率和總體生存率。HCC術(shù)后復(fù)發(fā)為影響HCC患