結(jié)直腸腺癌和結(jié)直腸腺瘤相關(guān)生物標(biāo)志物的臨床病理研究.pdf

1、研究目的
　　 研究生物標(biāo)志物CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為特點(diǎn)并探討上述標(biāo)志物與患者無瘤生存時(shí)間關(guān)系。尋找與結(jié)直腸腺癌預(yù)后相關(guān)的新的分子標(biāo)志物，以期為臨床治療提供更多的信息，減少?gòu)?fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。
　　 研究生物標(biāo)志物CD133及P53在結(jié)直腸腺瘤中表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為特點(diǎn)并探討在結(jié)直腸腺瘤中上述標(biāo)志物之間的相關(guān)性。為臨床早期診斷腺瘤癌變提供更多的信息，指導(dǎo)治療。

2、
　　 研究方法
　　 （1）采集解放軍總醫(yī)院病理科1999-2003年間實(shí)施根治性手術(shù)切除的并有完整隨訪資料的結(jié)直腸腺癌201例，手工制成組織芯片12塊，進(jìn)而采用PV9000二步法檢測(cè)結(jié)直腸腺癌相關(guān)標(biāo)志物CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)，分析其與臨床病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系。采集2004-2009年間實(shí)施手術(shù)或內(nèi)鏡下切除的結(jié)直腸腺瘤172例，用PV9000二步法檢測(cè)結(jié)直

3、腸腺瘤相關(guān)標(biāo)志物CD133及P53在結(jié)直腸腺瘤中表達(dá)，分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。
　　 （2）Western印記雜交法比較20例結(jié)直腸腺癌組織與相對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織中CD133和EphA3蛋白表達(dá)的不同。
　　 （3）RT-PCR檢測(cè)CD133基因的mRNA和在18例結(jié)直腸腺癌組織和相應(yīng)的癌旁正常組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果
　　 （1）CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67的表

4、達(dá)隨腫瘤浸潤(rùn)程度加深而增高（P<0.05）；CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67的表達(dá)隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多而增高（P<0.05）；CD133、CD147、LRP16及Ki-67在有腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的表達(dá)均明顯高于無轉(zhuǎn)移組（P<0.05）；CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67的表達(dá)均隨TNM分期遞增而增高[P<0.05）；CD147、LRP16及Ki-67的表達(dá)隨腫瘤分化程度的降低而升高。

5、>　　 （2）Ki-67在結(jié)直腸腺癌中表達(dá)與CD133、CD147及LRP16呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)分別為：r=0.498，r=0.380，r=0.394，P<0.05）。
　　 （3）CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織（P<0.05）.
　　 （4）單因素術(shù)后生存分析顯示：CD133、CD147、EphA3、LRP16、Ki-67、腫瘤大體類型、分化程度、浸潤(rùn)深

6、度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期這11種因素與患者的術(shù)后生存時(shí)間相關(guān)（P<0.05）。
　　 （5）COX多因素生存分析顯示：CD147及LRP16的陰性表達(dá)、腫瘤組織學(xué)分級(jí)低、腫瘤腸壁浸潤(rùn)深度淺、未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期低的患者術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)，預(yù)后較好（P<0.05）。
　　 （6）對(duì)20例新鮮結(jié)直腸癌手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行蛋白提取及定量，并通過Western印跡雜交法比較結(jié)直腸腺癌組織與癌旁正常組織中CD133及E

7、phA3蛋白表達(dá)異同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)直腸腺癌及癌旁組織均能與兔抗人CD133多克隆抗體及兔抗人EphA3多克隆抗體有特異性結(jié)合，分別在95kD處和135kD處可見有深染條帶，而且結(jié)直腺腸癌組織標(biāo)本CD133及EphA3蛋白的表達(dá)均高于相應(yīng)的癌旁正常組織（P<0.05）。
　　 （7）對(duì)18例新鮮結(jié)直腸腺癌手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，CD133mRNA在癌組織中表達(dá)高于相應(yīng)的癌旁正常組織（P<0.05）。
　　

8、 （8）CD133及p53在結(jié)直腸腺瘤中表達(dá)與腫瘤大小，病變程度及腫瘤組織學(xué)分型有關(guān)（P均<0.05）。
　　 （9）CD133和P53在結(jié)直腸腺瘤中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.344，P<0.05）。
　　 （10）CD133及p53在腺瘤組織中表達(dá)明顯高于正常粘膜組織（P<0.05）.
　　 結(jié)論
　　 （1）CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67在結(jié)直腸腺癌的表達(dá)情況與患者術(shù)后生存時(shí)

9、間相關(guān)，Ki-67在結(jié)直腺腸癌中表達(dá)與CD133、CD147及LRP16相關(guān)。
　　 （2）CD147、LRP16、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)深度、腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期是結(jié)直腸腺癌術(shù)后生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)后因子。
　　 （3）CD133、CD147、EphA3、LRP16及Ki-67均與結(jié)直腸腺癌的發(fā)生發(fā)展和（或）轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，上述生物標(biāo)志物可能對(duì)結(jié)直腸腺癌的演化和進(jìn)展起重要作用，并可能成為新的臨床輔助診斷和監(jiān)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)。