鵝脫氧膽酸：一個(gè)潛在的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物及其作為結(jié)直腸癌潛在治療靶點(diǎn)的研究.pdf

1、目的：
　　結(jié)直腸癌是胃腸道中常見(jiàn)的惡性腫瘤，是我國(guó)第三大最常見(jiàn)腫瘤，也是第五大癌癥相關(guān)死亡原因，其發(fā)病原因很復(fù)雜。在我們課題組前期的研究中，通過(guò)代謝譜分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌代謝物中有一些物質(zhì)含量發(fā)生了異常變化，或上升或降低，鵝脫氧膽酸（CDCA）就是其中一種。本研究的主要目的是為了探索鵝脫氧膽酸對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞功能的影響，從而為結(jié)直腸癌的治療提供一個(gè)新思路。
　　方法：
　　1、通過(guò)代謝組學(xué)技術(shù)，對(duì)健康對(duì)照組、結(jié)直腸癌良性

2、組和結(jié)直腸癌惡性組中各種代謝物的含量進(jìn)行分析。
　　2、用CCK-8法檢測(cè)不同CDCA濃度下活細(xì)胞的OD值，通過(guò)改良蔻式法算出CDCA對(duì)結(jié)直腸上皮正常細(xì)胞株FHC、結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480和DLD-1的半抑制濃度，選出合適的作用濃度，進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
　　3、根據(jù)篩選出的CDCA濃度，進(jìn)行腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性實(shí)驗(yàn)，包括克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)。
　　4、進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá)量。

3、
　　5、細(xì)胞流式實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)不同藥物濃度下細(xì)胞的凋亡情況。
　　6、線粒體功能實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)不同CDCA濃度對(duì)線粒體功能的影響，包括MMP、ROS和ATP的影響。
　　結(jié)果：
　　1、根據(jù)代謝譜結(jié)果，分析發(fā)現(xiàn)鵝脫氧膽酸的含量在健康對(duì)照組，結(jié)直腸癌良性組和結(jié)直腸癌惡性組中依次降低。
　　2、根據(jù)CCK-8篩選結(jié)果，計(jì)算得到正常結(jié)直腸細(xì)胞FHC的半抑制濃度為185μM，兩株結(jié)直腸癌細(xì)胞系中，SW480細(xì)胞株的半抑制

4、濃度為145μM，DLD-1細(xì)胞株的半抑制濃度為71μM，選定SW480細(xì)胞株的CDCA工作濃度為0μM、150μM、160μM和180μM；DLD-1細(xì)胞株的工作濃度為0μM、80μM、130μM和180μM。
　　3、腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性實(shí)驗(yàn)中，DLD-1細(xì)胞株的克隆形成能力隨著CDCA濃度的增加而降低，劃痕閉合速率隨著CDCA濃度的增加而減慢；兩株細(xì)胞的transwell小室遷移遷移能力也隨著藥物濃度增加而降低。
　　4

5、、WB實(shí)驗(yàn)中，兩株細(xì)胞系的凋亡蛋白Bax表達(dá)量隨著藥物濃度增加而上升，抗凋亡蛋白Bcl-xl表達(dá)量隨著藥物濃度增加而降低。
　　5、進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩株細(xì)胞的凋亡細(xì)胞百分比隨著藥物濃度的增加而上升。
　　6、線粒體功能實(shí)驗(yàn)中，線粒體膜電位隨著CDCA濃度升高而降低，線粒體ROS含量隨著CDCA濃度上升而下降，而ATP產(chǎn)生量隨著CDCA濃度上升而上升。
　　結(jié)論：
　　根據(jù)代謝譜結(jié)果，得到鵝脫氧膽酸在血清中

6、的含量，在健康對(duì)照組，結(jié)直腸癌良性組和結(jié)直腸癌惡性組中依次降低，據(jù)此我們推測(cè)鵝脫氧膽酸的代謝異常可能跟結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，因此鵝脫氧膽酸是一種潛在的結(jié)直腸癌生物標(biāo)志物。根據(jù)代謝譜的結(jié)果，我們通過(guò)細(xì)胞水平，對(duì)鵝脫氧膽酸的作用進(jìn)行了更深入的研究，包括腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)，以及線粒體功能檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)鵝脫氧膽酸對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞系的增殖，有明顯的抑制作用，對(duì)細(xì)胞遷移也有抑制作用。根據(jù)細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)量的檢測(cè)和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)