抗HIV-1 gp41合成多肽gp41-5單克隆抗體的制備、鑒定及初步應(yīng)用.pdf

1、本研究首先以人類(lèi)免疫缺陷病毒HIV-1囊膜糖蛋白gp41多肽免疫小鼠，采用雜交瘤技術(shù)制備并獲得了針對(duì)gp41-5多肽的4株mAb，分別命名為E10、2H6、2C1、E12。采用ELISA間接法進(jìn)一步鑒定了mAb的特異性：分別包被N36、C34、N36(L6)C34、N51(L6)C46多肽，檢測(cè)抗gp41-5多肽的mAb腹水；包被gp41-5多肽，分別檢測(cè)抗N51(L6)C46多肽的mAb1A2、1A4、189、3A1，抗N36(L6)

2、C34多肽的mAbNC-1，以及本次獲得的抗gp41-5多肽的4株mAbE10、2H6、2C1、E12。結(jié)果顯示，mAbE10、2H6、2C1、E12均與gp41-5多肽反應(yīng)，與N36、C34、N36(L6)C34和N51(L6)C46多肽均不反應(yīng)；抗N51(L6)C46mAb1A2、1A4、1B9、3A1亦不與gp41-5多肽反應(yīng)，因此表明我們制備的mAb具有很高的特異性，并提示它們是抗gp41融合態(tài)構(gòu)象的mAb。將這4株mAb與mA

3、bNC-1的抗體相對(duì)親和力作比較，其高低依次為NC-1＞E10＞E12＞2C1＞2H6。位點(diǎn)相加和競(jìng)爭(zhēng)ELISA法分析其抗原表位，發(fā)現(xiàn)這4株mAb中E10、E12、2C1均識(shí)別不同的抗原表位，而2H6識(shí)別的抗原表位可能與E12、2C1及NC-1識(shí)別的抗原表位均有交叉。另外，E12與NC-1識(shí)別不同的抗原表位，其余3株mAb識(shí)別的抗原表位與NC-1也有差異。 在此基礎(chǔ)上，選取mAbE12為包被抗體，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的2H6作為酶