β-氨基酸對映體的分離、分析和制備.pdf

1、由β-氨基酸構(gòu)成的擬多肽即β-肽的藥理活性和構(gòu)效關(guān)系的研究是近年來藥物科學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題之一.將β-氨基酸引入多肽結(jié)構(gòu)中,克服了α-肽易被蛋白水解酶降解、口服可獲性低等缺陷,β-肽顯示出抑制代謝的活性、具有更加穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)且與目標(biāo)酶和受體顯示更強(qiáng)的親和力.β-肽對映異構(gòu)體在體內(nèi)可能表現(xiàn)出不同的藥理活性和藥代動力學(xué)性質(zhì).為了研究單一對映體的藥理行為和代謝途經(jīng),首先必須獲得β-肽的單一對映體.如果合成β-肽的消旋體再進(jìn)行拆分,β-肽為大分

2、子物質(zhì)較難拆分；如果對其中間體β-氨基酸進(jìn)行拆分,由于β-氨基酸為小分子物質(zhì)且含有酸性和堿性基團(tuán),可選擇的分離分析模式多、方法簡便,得到的單一對映體再制備β-肽就較簡單易行.在本論文中我們分別采用毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法這兩種高效、簡便、快速且應(yīng)用最廣泛的拆分手段,對β-氨基酸外消旋體進(jìn)行了手性拆分并對其拆分機(jī)理進(jìn)行了探討,而且實現(xiàn)了制備,并在此基礎(chǔ)上初步探索了化學(xué)法和酶法拆分β-氨基酸.為了快速測定消旋體中的對映體比例,我們首先建

3、立了β-氨基酸的毛細(xì)管電泳手性分離分析方法.以酒石酸為原料,經(jīng)過酯化、酰胺化、環(huán)合、脫酰胺保護(hù)等步驟合成了手性拆分試劑18-冠-6-四羧酸(18C6H4).基于在低pH時氨基酸對映體以伯胺離子形式與18C6H<,4>形成的兩種非對映體絡(luò)合物,在毛細(xì)管電泳的條件下,兩者具有不同的遷移時間而得以分離.以手性冠醚為手性添加劑的毛細(xì)管電泳法成功地用于五種β-氨基酸對映體的分離,分離因子高達(dá)1.08.實驗結(jié)果表明,該方法快速、簡便,可以用于非色譜

4、法拆分β-氨基酸的監(jiān)測方法. 發(fā)展了β-氨基酸的高效液相色譜手性分離分析方法.首先在流動相中加入光學(xué)純L-α-氨基酸作為手性配體,通過流動相中Cu<'2+>與β-氨基酸的D-和L-型對映體形成兩種非對映體的絡(luò)合物平衡常數(shù)的差別,在反相液相色譜系統(tǒng)中可實現(xiàn)β-氨基酸對映體的拆分.該法選擇性高,但系統(tǒng)平衡慢、基線波動大、色譜柱易堵塞.為了克服上述弊端,我們將L-α-氨基酸鍵合于硅膠上,制備了手性配體交換色譜固定相,用于β-氨基酸對映