不同濃度乙醇對TNBS誘導小鼠克羅恩病模型的影響.pdf

1、目的：克羅恩病在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，作為其嚴重并發(fā)癥之一腸纖維化，在CD患者中發(fā)病率高達33.3％，后期常因腸腔狹窄發(fā)生而需要進一步檢查手段及手術(shù)治療，但術(shù)后患者約有40%可再次發(fā)生腸狹窄。目前，尚無有效的根治性治療手段及方法。本實驗擬通過建立2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）小鼠CD腸纖維化模型，通過探討不同濃度乙醇對各組模型的影響，選擇模型制備所需最佳乙醇濃度，建立適合實驗要求的動物模型，為后期研究CD抗腸纖維化的相關(guān)藥物

2、研究提供可靠的實驗依據(jù)。
　　方法:將48只BALB/c小鼠實驗性飼養(yǎng)1周后，隨機分為：正常對照組、TNBS/20%乙醇濃度組、TNBS/40%乙醇濃度組、TNBS/50%乙醇濃度組，每組12只。小鼠禁食、不禁飲24h后，3%水合氯醛腹腔注射輕度麻醉，造模組分別用不同濃度（20%、40%、50%）乙醇/2.0mgTNBS混合液灌腸，正常對照組給予等量的生理鹽水，觀察小鼠每日表現(xiàn)、稱重、化驗大便常規(guī)、潛血實驗，自灌腸第2日起每日統(tǒng)計

3、生存率，第6周統(tǒng)計總生存率。模型組小鼠使用3.5 F導管自肛門插入結(jié)腸深約3.5 cm（距肛緣）處，小鼠頭朝下呈倒立位，將各組造模用灌腸液緩慢注入結(jié)腸，每只小鼠灌入藥液100ul，停留30 s后輕輕拔出導管，再倒懸60 s左右，為防止藥液流出，期間用手指堵住小鼠肛門口，后放回籠中，待其自然蘇醒。正常對照組以同等體積生理鹽水灌腸。灌腸共6周，后正常飼養(yǎng)。于第7周處死所有小鼠。分離結(jié)腸，沿腸系膜緣剪開腸腔，生理鹽水（或PBS沖洗液）充分沖洗

4、糞便，取距肛門3 cm以上及結(jié)腸病變最明顯部分，保存于10%甲醛固定液中。觀察小鼠結(jié)腸肉眼觀和組織學變化及腸道纖維化情況。
　　結(jié)果：TNBS/20%乙醇濃度組、TNBS/40%乙醇濃度組和TNBS/50%乙醇濃度組小鼠均不同程度出現(xiàn)CD的一般臨床表現(xiàn)。各組小鼠（正常對照組、TNBS/20%乙醇濃度組、TNBS/40%乙醇濃度組、TNBS/50%乙醇濃度組順序排列）DAI評分分別為：1.27±0.78，3.90±0.56，5.50

5、±0.52，8.56±1.13，DAI評分結(jié)果顯示，隨著乙醇濃度的增加，各模型組小鼠的 DAI評分遞增，以TNBS/50%乙醇組最高（P<0.01）。2.0TNBS/50%乙醇組與2.0TNBS/20%乙醇組及2.0TNBS/40%乙醇組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），2.0TNBS/20%乙醇組與正常對照組相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；炎癥評分分別為：0.36±0.50，1.40±0.51，2.00±0.81，3.

6、22±0.66，炎癥評分結(jié)果顯示，隨著乙醇濃度的增加，各模型組小鼠的炎癥評分遞增，以TNBS/50%乙醇組最高（P<0.01）。TNBS/50%乙醇組與TNBS/40%乙醇組TNBS/20%乙醇組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），TNBS/20%乙醇組與正常對照組相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；生存率分別為：91.7%，83.3%，83.3%，75.0%。行 VG染色觀察各組別小鼠的腸道纖維化情況，根據(jù)各組小鼠的腸道纖維

7、化評分結(jié)果得出：隨乙醇濃度增加，各模型組小鼠的腸道纖維化評分遞增，以TNBS/50%乙醇組評分最高，TNBS/50%乙醇組與TNBS/40%乙醇組TNBS/20%乙醇組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），TNBS/20%乙醇組與正常對照組相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.隨著乙醇濃度增加，小鼠的DAI、腸道病理學及纖維化評分逐漸增高，以TNBS/50%乙醇濃度組最為顯著，與人類CD病理學及組織學變化較為