二烯丙基二硫下調(diào)calreticulin誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化.pdf

1、目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）下調(diào)calreticulin誘導(dǎo)人白血病HL-60細(xì)胞分化，探討DADS誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的分子機(jī)制。
　　方法：采用Giemsa染色檢測形態(tài)學(xué)的改變， siRNA、MTT、QPCR、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究DADS下調(diào)鈣網(wǎng)織蛋白（calreticulin, CRT）誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化以及沉默CRT在DADS誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化的作用

2、。
　　結(jié)果：
　　1.形態(tài)學(xué)觀察DADS對HL-60細(xì)胞的影響
　　形態(tài)學(xué)觀察顯示，1.25mg·L-1 DADS處理HL-60細(xì)胞48h、72 h后，細(xì)胞的胞漿豐富，胞核變小，核漿比例縮小。
　　2. DADS對HL-60細(xì)胞CRT表達(dá)的影響
　　QPCR檢測顯示，DADS處理HL-60細(xì)胞后，CRT可以在mRNA水平表達(dá)降低，并呈時間依賴性降低（P<0.05）。Western blot顯示，DADS處

3、理HL-60細(xì)胞后，CRT蛋白表達(dá)隨著時間延長逐漸下降（P<0.05）。
　　3.沉默CRT基因?qū)L-60細(xì)胞CRT表達(dá)的作用
　　沉默HL-60細(xì)胞CRT基因48h和72h后，CRT mRNA表達(dá)較對照組分別顯著下調(diào)(P<0.05)。而DADS處理對照組與干擾組48h和72h組后，CRT mRNA表達(dá)分別較對照組與干擾組明顯下調(diào)(P<0.05)。同時，CRT蛋白表達(dá)分別較對照組明顯降低(P<0.05)。DADS處理對照組

4、與干擾組48h和72h后，分別較處理前顯著下調(diào)(P<0.05)。
　　4.沉默CRT基因?qū)L-60細(xì)胞增殖的影響
　　MTT檢測顯示，在24、48、72、96h各時間段，與對照組相比，干擾組增殖能力呈時間依賴性明顯降低(P<0.05)。而 DADS處理對照組和干擾組后較處理前對照組和干擾組亦呈時間依賴性抑制增殖(P<0.05)。
　　5.沉默CRT基因?qū)L-60細(xì)胞CD33和CD11b表達(dá)的影響
　　流式細(xì)胞