白芍總苷抗肝癌作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文研究目的：探討白芍總苷(totalglucosidesofpaeony,TGP)對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、HepG2細(xì)胞的體外增殖抑制作用和HepG2細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其機(jī)制。 研究方法：采用MTT法檢測TGP對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、HepG2細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用熒光顯微鏡觀察藥物作用后的細(xì)胞的形態(tài)；流式細(xì)胞術(shù)檢測TGP對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。采用HepG2細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型，TGP灌胃給藥觀察

2、對(duì)裸鼠HepG2細(xì)胞移植瘤的生長抑制作用；腫瘤組織蘇木精-伊紅染色觀察藥物作用后的細(xì)胞的形態(tài)。 研究結(jié)果： 1.TGP的體外抗肝腫瘤作用。 1.1TGP對(duì)HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用采用MTT法檢測TGP對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用。TGP在1.0～5.0mg.ml-1濃度范圍內(nèi)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有抑制作用，藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性關(guān)系(直線回歸分析r=0.950，P＜0.01)。

3、 1.2TGP對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制作用采用MTT法，TGP在0.5～5.0mg.ml-1濃度范圍內(nèi)對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721有抑制作用，藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性關(guān)系(直線回歸分析r=0.991.P＜0.01)。 2.TGP的體內(nèi)抗肝腫瘤作用。采用HepG2細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型，觀察瘤重及計(jì)算抑瘤率，TGP灌胃給藥對(duì)模型裸鼠HepG2細(xì)胞移植瘤的生長有明顯抑制作用。TGP低、中、高

4、三個(gè)劑量(200、400和800mg.kg-1.d-1×30d)治療裸鼠HepG2移植瘤的平均抑瘤率分別為：34.96％、51.49％、58.53％。提示TGP具有體內(nèi)抗肝腫瘤作用。用藥后小鼠體重均有所增加，未見明顯毒副作用，表明TGP在本實(shí)驗(yàn)條件下具有良好的安全性。 3.TGP誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 3.1TGP誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察。TGP(1.0mg.ml-1，1.5mg.ml-1，2.5mg.ml-1)分別作用

5、后的SMMC-7721、HepG2細(xì)胞在72h可出現(xiàn)細(xì)胞核體積縮小，熒光染色增強(qiáng)，同時(shí)細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)可見到致密濃染的塊狀或顆粒狀的黃綠色熒光染色或黃綠色碎片，對(duì)照組細(xì)胞可見細(xì)胞核飽滿，出現(xiàn)黃色或黃綠色的均勻熒光，細(xì)胞質(zhì)為橘黃色或橘紅色的均勻熒光染色。瘤組織蘇木精-伊紅染色后，光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，TGP治療組：細(xì)胞排列較稀疏，形態(tài)變異明顯，胞體大小不一，核仁消失，核碎裂、核固縮的凋亡細(xì)胞增多。 3.2TGP誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞儀

6、分析。對(duì)照組HepG2細(xì)胞G0/G1期為66.6％、S期為24.1％、G2/M期為7.51％；HepG2細(xì)胞與TGP(1.0mg.ml-1，1.5mg.ml-12.5mg.ml-1)共育72h后，G0/G1期細(xì)胞呈劑量依賴性減少，分別為58.9％，49.6％，31.5％；S期呈劑量依賴性增加，分別為21.0％，27.2％，39.3％；G2/M期相對(duì)穩(wěn)定并下降14.1％，14.5％，10.5％。TGP(1.0mg.ml-1，1.5mg.m