上皮向間葉轉(zhuǎn)化(EMT)在胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的發(fā)生及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分
　　 背景和目的：胰腺癌是一種惡性的消化系統(tǒng)腫瘤，具有強(qiáng)烈的向周圍組織侵襲的傾向以及對(duì)化療的抵抗能力，導(dǎo)致胰腺癌病人的預(yù)后非常差。SnaIl是一種抑制型的轉(zhuǎn)錄因子，可以賦予上皮細(xì)胞移動(dòng)以及抗凋亡的能力。其表達(dá)在多種腫瘤組織中都有報(bào)道。SnaIl 可能在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)并且賦予胰腺癌細(xì)胞侵襲和抵抗化療的能力。
　　 方法：為了論證此假設(shè)，我們通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)了SnaIl在胰腺癌組織中的表達(dá)，以及和臨床病

2、例指標(biāo)的相關(guān)性。同時(shí)我們將SnaIl 編碼基因轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞系Panc-1 細(xì)胞，通過(guò)Transwell 侵襲小室法檢測(cè)SnaIl 對(duì)Panc-1 細(xì)胞體外侵襲能力的影響；通過(guò)MTT 細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染SnaIl基因?qū)anc-1 細(xì)胞增殖以及對(duì)5-氟尿嘧啶、吉西他濱等化療藥物敏感性的影響；通過(guò)裸鼠接種實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SnaIl基因?qū)σ认侔┘?xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)的影響。
　　 結(jié)果：SnaIl在胰腺癌組織中存在著表達(dá)，在56例胰腺癌組織中發(fā)現(xiàn)有

3、20例SnaIl的表達(dá)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率達(dá)36[％]。此外SnaIl的表達(dá)同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移都存在有明顯的相關(guān)性。Panc-1 細(xì)胞在轉(zhuǎn)染了SnaIl基因之后發(fā)生了明顯的從上皮細(xì)胞表型向間葉細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)化，同時(shí)其在體內(nèi)外的侵襲能力也大大增強(qiáng)。另外SnaIl的表達(dá)還賦予了Panc-1 細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶和吉西他濱的抵抗能力。
　　 結(jié)論：Sn ail在胰腺癌組織中存在著表達(dá)，并且可以賦予胰腺癌細(xì)胞高度的侵襲和抵抗凋亡的能力。Sna

4、Il 有可能作為一種預(yù)測(cè)胰腺癌惡性程度的標(biāo)志，發(fā)展針對(duì)SnaIl的治療措施可能為提高胰腺癌患者的預(yù)后提供新的思路。
　　 第二部分
　　 目的：探討上皮向間葉轉(zhuǎn)化(EMT)在胰腺癌組織中的發(fā)生情況，研究上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin、間葉細(xì)胞標(biāo)記物vimentin在胰腺癌組織及胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況以及與胰腺癌惡性生物學(xué)行為的相關(guān)性。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)56例胰腺癌組織中E-cadheri

5、n、vimentin蛋白的表達(dá)，并與臨床病理資料作對(duì)照分析。同時(shí)應(yīng)用Western blot和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Snail、E-cadherin、vimentin 三種標(biāo)記物分子在不同胰腺癌細(xì)胞Miapaca-2、Panc-1、BxPc-3 中的表達(dá)情況，通過(guò)Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同細(xì)胞侵襲能力的差異。
　　 結(jié)果：56例胰腺癌組織中26例(46.4[％])觀察到E-cadherin 表達(dá)降低，同時(shí)6例觀察到vimen

6、tin 表達(dá)上調(diào)。E-cadherin的表達(dá)抑制和胰腺癌的淋巴結(jié)浸潤(rùn)(P=0.021),遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.001),病理分級(jí)(P=0.049)呈顯著性相關(guān)。而6例vimentin 表達(dá)上調(diào)的胰腺癌組織中有3例發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。E-cadherin 表達(dá)的降低和vimentin的高表達(dá)都與Snail的表達(dá)存在著明顯的相關(guān)性。在高分化的胰腺癌細(xì)胞BxPc-3 中，E-cadherin 呈現(xiàn)高表達(dá)，未發(fā)現(xiàn)有vimentin和Snail的表達(dá)，相

7、對(duì)應(yīng)的細(xì)胞體外侵襲能力較差。在中低分化的胰腺癌細(xì)胞Panc-1、Miapaca-2 中vimentin、Snail 表達(dá)逐漸增強(qiáng)，E-cadherin 表達(dá)明顯降低，相對(duì)應(yīng)的細(xì)胞在體外的侵襲能力則大大增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：胰腺癌的侵襲過(guò)程中存在著腫瘤細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)記物的降低，同時(shí)間葉細(xì)胞標(biāo)記物的增強(qiáng)，EMT 可能參與了胰腺癌侵襲性生物學(xué)行為。Snail 可能通過(guò)調(diào)控EMT 從而導(dǎo)致了胰腺癌細(xì)胞侵襲性表型。
　　 第三部分<

8、br>　　 目的：探討缺氧微環(huán)境對(duì)胰腺癌細(xì)胞上皮向間葉轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)效應(yīng)以及可能機(jī)制。
　　 方法：在缺氧微環(huán)境下培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞Panc-1，Transwell 侵襲小室對(duì)比檢測(cè)細(xì)胞在缺氧微環(huán)境下侵襲能力的變化情況。通過(guò)Western blot、免疫熒光檢測(cè)缺氧對(duì)Panc-1 細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)記分子E-cadherin、間葉細(xì)胞標(biāo)記分子vimentin 表達(dá)的影響。同時(shí)通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)缺氧對(duì)Panc-1 細(xì)胞Snail m

9、RNA 表達(dá)的影響。為了探討缺氧微環(huán)境誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞發(fā)生表型改變的機(jī)制，將編碼HIF-1 α siRNA的真核表達(dá)載體pGenesil-1-HIF-1 α及對(duì)照載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Panc-1 細(xì)胞，通過(guò)缺氧處理，Western blot檢測(cè)沉默HIF-1 α之后對(duì)Panc-1 細(xì)胞E-cadherin、vimentin 表達(dá)的影響；逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)抑制HIF-1 α對(duì)Snail mRNA 表達(dá)的影響；通過(guò)Transwell 侵襲小室檢測(cè)對(duì)細(xì)胞

10、體外侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果：處于缺氧微環(huán)境下的Panc-1 胰腺癌細(xì)胞在體外侵襲能力大大增強(qiáng)，缺氧可以抑制上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cadherin、增強(qiáng)間葉細(xì)胞標(biāo)記分子vimentin的表達(dá)，活化轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達(dá)。缺氧微環(huán)境下通過(guò)RNA 干擾技術(shù)沉默HIF-1 α之后可以恢復(fù)缺氧對(duì)E-cadherin的抑制，同時(shí)降低vimentin和Snail的表達(dá)，抑制缺氧環(huán)境中細(xì)胞在體外的侵襲能力。
　　 結(jié)論：缺氧微環(huán)境可