bFGF基因轉(zhuǎn)染MSCs對(duì)COPD的修復(fù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究外源性堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)COPD造模大鼠的修復(fù)作用及其機(jī)制。
　　方法:全骨髓貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)4-5周SD大鼠的BMSCs,并用CM-Dil做熒光標(biāo)記。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將bFGF基因轉(zhuǎn)染入BMSCs,用qRT-PCR及Western-blot測(cè)轉(zhuǎn)染后bFGF基因及其目的蛋白的表達(dá)量。煙熏及脂多糖(LPS)氣管滴入復(fù)合方法構(gòu)建COPD大鼠模型。本課題分為5個(gè)實(shí)驗(yàn)組

2、,共50只大鼠,隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組(NC組)、COPD對(duì)照組(PC組)、MSCs治療組(M組)、pcDNA3.1-MSCs治療組(P組)、bFGF-pcDNA3.1-MSCs治療組(B組)。NC組:尾靜脈注入3ml PBS液作陰性對(duì)照,PC組:造模后立即尾靜脈注入3ml PBS液作陽(yáng)性對(duì)照,M組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代MSCs1×107/3ml PBS液,P組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代pcDNA3.1-MSCs1×

3、107/3ml PBS液,B組:造模后立即尾靜脈注入標(biāo)記的第3代bFGF-pcDNA3.1-MSCs1×107/3ml PBS液。以上各組大鼠在給藥后30天統(tǒng)一采集動(dòng)脈血行血?dú)夥治鰴z測(cè),行肺泡灌洗術(shù)收集肺泡灌洗液計(jì)數(shù)WBC及N％,并取大鼠肺組織制作冰凍切片觀察BMSCs定植情況、HE染色觀察其病理形態(tài)及測(cè)量MAN、MAA及MLI值。
　　結(jié)果:1、成功分離大鼠BMSCs,流式細(xì)胞表型檢測(cè)CD44、CD29陽(yáng)性,CD34陰性,鑒定成

4、功;2、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用qRT-PCR檢測(cè)其基因表達(dá)量,結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達(dá)bFGF基因,較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達(dá)其目的基因;3、bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs后用 Western-blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)量,結(jié)果示轉(zhuǎn)染了bFGF-pcDNA3.1質(zhì)粒的BMSCs大量表達(dá)bFG

5、F目的蛋白,較轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1空白質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并可大量表達(dá)其目的蛋白;4、標(biāo)記的BMSCs移植入大鼠體內(nèi)后28天肺組織病理可見(jiàn)紅色點(diǎn)狀的呈簇狀分布的熒光,說(shuō)明BMSCs在大鼠肺組織內(nèi)成功定植;5、血?dú)夥治鲋?PC組、M組、P組、B組均有輕度低氧血癥表現(xiàn),無(wú)二氧化碳潴留及酸中毒表現(xiàn),PC組、M組、P組、B組PO2、SaO2值均低于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、,其中M組、P組、B組PO2值均高于PC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而這3組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但B組PO2值較M組、P組有升高趨勢(shì);6、肺泡灌洗液WBC及N%計(jì)數(shù):NC組、M組、P組、B組的WBC及N%計(jì)數(shù)均明顯低于PC組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而其之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中B組WBC及N%計(jì)數(shù)較M組、P組相比無(wú)減少趨勢(shì),M組、P組、B組3個(gè)治療組WBC及N%計(jì)數(shù)均稍高于NC組;7、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MAN、MAA:PC組、M組、P組、B組

7、MAN、MAA值均低于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中M組、P組、B組MAN、MAA值均高于PC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而這3組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但B組MAN、MAA值較M組、P組有升高趨勢(shì);8、肺組織病理形態(tài)參數(shù)MLI值:PC組、M組、P組、B組均高于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中M組、P組、B組MLI值均低于PC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而這3組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,B組MLI值較M組、P組無(wú)下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論:1.外源性bFG

8、F基因成功轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs并可大量表達(dá)其目的基因及目的蛋白;2.外源性BMSCs經(jīng)尾靜脈注射后可以到達(dá)COPD造模大鼠的肺組織并可成功實(shí)現(xiàn)在局部定植;3.外源性bFGF-pcDNA3.1-BMSCs移植治療對(duì)COPD造模大鼠的修復(fù)效果較明確,較單純?cè)炷＝MCOPD程度有明顯改善,較單純BMSCs移植治療組有增加趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因此尚不能推斷bFGF有明顯的修復(fù)COPD作用;4.單純BMSCs移植治療對(duì)COPD造模大鼠的修復(fù)效