牙周韌帶細(xì)胞與骨髓基質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)牙周組織再生能力的比較研究.pdf

1、目的：比較骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)和牙周韌帶細(xì)胞(periodontal ligament cells，PDLCs)促進(jìn)牙周組織再生的能力，為牙周組織的再生治療提供依據(jù)。
　　 方法：1.體外觀察α-MEM、DMEM-LG和RPMI1640三種培養(yǎng)基對(duì)Beagle犬BMSCs增殖與分化的影響。2.體外觀察脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(acellular dermal matrix，ADM)

2、與BMSCs生物相容性；并將ADM作為成骨誘導(dǎo)后BMSCs的載體，植入裸鼠皮下，單純的ADM作為對(duì)照組，分別于術(shù)后4W和8W觀察大體標(biāo)本及組織學(xué)情況。3.體外通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescence quantitative polymerase chainreaction,Realtime PCR)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Von Kosssa染色等方法比較BMSCs和PDLCs再生組織的能力。4.將雄性裸

3、鼠12只隨機(jī)分兩組，每組6只，于每只皮下植入ADM、BMSCs+ADM、PDLCs+ADM。4W和8W后分別處死一組取標(biāo)本，常規(guī)固定、脫鈣、包埋、切片后進(jìn)行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色、Gomori特殊染色和免疫組化染色，以比較BMSCs和PDLCs再生組織的潛能。
　　 結(jié)果：1.α-MEM組24h內(nèi)貼壁的細(xì)胞數(shù)目最多；消除貼壁差異后，α-MEM和DMEM促增殖作用相近；α-MEM組堿性磷酸酶(

4、alkaline phosphatase，ALP)表達(dá)量最高，但礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)目較少，DMEM組礦化結(jié)節(jié)形成個(gè)數(shù)最多。2.體外培養(yǎng)觀察BMSCs與ADM有良好的生物相容性；實(shí)驗(yàn)組4W，ADM部分降解吸收，BMSCs在其中生長良好，出現(xiàn)新生組織，部分出現(xiàn)類骨樣結(jié)構(gòu)；8W，ADM大部分吸收，形成大量的新生組織和類骨樣結(jié)構(gòu)：?jiǎn)渭傾DM組新生組織形成較少，支架材料降解速度與實(shí)驗(yàn)組類似。3.Realtime PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PDLCs中膠原Ⅻ和

5、骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)表達(dá)量都高于BMSCs(P＜0.05)，ALP表達(dá)含量在二者之間差異無顯著性(P＞0.05)；細(xì)胞免疫組化染色顯示PDLCs中膠原Ⅻ表達(dá)的量高于BMSCs(P＜0.05)，而OPG染色、ALP活性檢測(cè)及Von Kosssa染色結(jié)果都表明BMSCs成骨能力高于PDLCs。4.4W和8W組織學(xué)觀察和免疫組化染色顯示BMSCs形成類骨樣結(jié)構(gòu)多于PDLCs，而牙周韌帶形成能力仍小于PDLCs。<