闌尾切除及口服耐受對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的作用及相關(guān)機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察闌尾切除及口服免疫耐受對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的作用，探討有關(guān)Th1/Th2平衡和γδT細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制，探索闌尾切除和口服免疫耐受在炎癥性腸病中的干預(yù)作用及相關(guān)機(jī)制。 方法：建立葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型。分別于小鼠闌尾切除或假手術(shù)后予葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎，評價結(jié)腸病理改變。于正常小鼠、闌尾切除后及假手術(shù)后小鼠中建立單次大劑量口服卵白蛋白或多次小劑量口服卵白蛋白誘導(dǎo)的口服免疫耐受模型，觀察特異性遲發(fā)型超敏反應(yīng)

2、的改變。提取結(jié)腸提取蛋白，檢測用結(jié)腸提取蛋白小劑量多次口服后對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎作用。觀察闌尾切除或假手術(shù)后口服結(jié)腸提取蛋白對葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎作用的改變，并用流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟、腸道集合淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞Th1/Th2平衡變化和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、固有層淋巴細(xì)胞中γδT細(xì)胞改變。 結(jié)果：(1)闌尾切除可有效保護(hù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎，伴疾病活動指數(shù)(5.56±1.99vs9.94±1.57,n=8，P＜0.001)和病理

3、評分(30.75±4.65vs50.13±9.72，n=8，P＜0.001)的顯著改善。 (2)單次口服20毫克或反復(fù)5次口服250微克OVA均可誘導(dǎo)小鼠對OVA皮下致敏產(chǎn)生的DTH反應(yīng)的耐受(1.25mm±0.551mmvs2.35mm±0.423mm，n=6，P＜0.01；0.53mm±0.175mmvs2.40mm±0.490mm,n=6,P＜0.001)。 (3)闌尾切除可以消除單次口服20毫克OVA或推遲反復(fù)5

4、次口服250微克OVA小鼠對OVA皮下致敏產(chǎn)生的對DTH反應(yīng)的耐受。 (4)闌尾切除可以消除單次口服20毫克或反復(fù)5次口服250微克OVA小鼠在DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎過程中OVA皮下致敏產(chǎn)生的對DTH反應(yīng)的耐受。 (5)口服CEP可有效減輕小鼠DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎，伴疾病活動指數(shù)(7.83±1.47vs9.83±1.17,n=6，P＜0.05)和病理評分(23.67±12.13vs46.50±12.16,n=6，P＜0.05)的顯

5、著改善。 (6)闌尾切除可減弱口服CEP對DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的干預(yù)作用。 (7)闌尾切除對口服CEP干預(yù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的抑制作用僅與腸道集合淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞的Th1細(xì)胞減少(闌尾切除組：11.5％±3.7％vs15.2％±7.1％,n=6，P＞0.05；假手術(shù)組：10.0％±7.6％vs23.5％±7.8％,n=6，P＜0.05)所致Th1/Th2下降(闌尾切除組：0.66±0.30vs0.77±0.49,n=6,

6、P＞0.05：假手術(shù)組：0.32±0.21vs1.58±0.79,n=6,P＜0.05)相關(guān)；而與脾臟淋巴細(xì)胞的Th1(闌尾切除組：28.5％±15.5％vs26.9％±5.7％，n=6，P＞0.05；假手術(shù)組：21.3％±9.7％vs27.1％±16.0％，n=6，P＞0.05)或Th2(闌尾切除組：36.7％±16.2％vs40.5％±20.8％，n=6，P＞0.05；假手術(shù)組：26.2％±12.8％vs33.4％±15.8％，n=

7、6，P＞0.05)細(xì)胞改變無關(guān)。 (8)闌尾切除對口服CEP干預(yù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的抑制作用僅與抑制腸道固有層淋巴細(xì)胞的γδT(闌尾切除組：9.67％±4.34％vs7.32％±4.37％，n=6,P＞0.05；假手術(shù)組：8.06％±1.92％vs17.11％±8.15％，n=6，P＜0.05)或CD8+γδT(闌尾切除組：7.03％±3.25％vs5.65％±3.48％，n=6,P＞0.05；假手術(shù)組：5.90％±1.35％

8、vs13.17％±6.79％，n=6,P＜0.05)細(xì)胞減少相關(guān)；而與腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的γδT(闌尾切除組：21.8％±3.9％vs18.7％±4.4％，n=6,P＞0.05；假手術(shù)組：19.6％±5.9％vs22.3％±6.2％，n=6,P＞0.05)或CD8+γδT(闌尾切除組：15.4％±3.2％vs15.0％±3.9％，n=6,P＞0.05；假手術(shù)組：15.8％±5.0％vs17.7％±4.6％，n=6,P＞0.05)細(xì)胞無關(guān)

9、。 結(jié)論：(1)建立了小鼠DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎和OVA誘導(dǎo)口服耐受模型。 (2)證實(shí)闌尾切除及口服CEP對小鼠DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎有干預(yù)作用。 (3)闌尾切除可抑制正常或DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠中OVA誘導(dǎo)的口服耐受現(xiàn)象。 (4)闌尾切除也可抑制口服CEP誘導(dǎo)耐受干預(yù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎。 (5)闌尾切除對口服CEP誘導(dǎo)耐受干預(yù)DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎抑制作用可能與腸道集合淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞的Th2→Th1平衡偏移及