駱駝奶對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘發(fā)的小鼠急慢性腸炎的影響.pdf

1、目的:駱駝對(duì)干旱、荒漠地區(qū)的適應(yīng)能力很強(qiáng)，并且能在此類惡劣環(huán)境中把富含鹽堿的粗硬植物轉(zhuǎn)化為營養(yǎng)豐富的乳、肉以及毛絨等產(chǎn)品。駱駝泌乳時(shí)間長，駱駝奶一方面蛋白質(zhì)含量與鈣含量都高于牛奶，而另一方面脂肪含量低于牛奶;鐵元素含量是牛奶的10倍，而且尚未見駱駝奶引起過敏的報(bào)道，這對(duì)于喝牛乳過敏的人來說，駱駝奶就成為了很好的替代品。胃腸道粘膜是對(duì)抗異己分子入侵的第一道防線，腸黏膜組織中免疫細(xì)胞的組成具有其自身的特殊性，在機(jī)體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著極其重要的作用

2、。腸道免疫系統(tǒng)由腸相關(guān)淋巴樣組織、腸黏膜免疫細(xì)胞和免疫介質(zhì)等組成，是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。一般情況下，黏膜免疫細(xì)胞通常對(duì)腸道內(nèi)的正常微生物群和食物抗原表現(xiàn)為免疫耐受，而對(duì)于病原微生物則誘發(fā)免疫應(yīng)答，產(chǎn)生免疫反應(yīng)。細(xì)胞因子主要由免疫細(xì)胞分泌，是一種小分子多肽，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中具有重要的功能。促炎因子和抗炎因子共同調(diào)解，維持局部免疫平衡，生理功能。目前認(rèn)為，腸道炎癥的啟動(dòng)及腸道炎癥慢性化在很大程度上與促炎因子和抗炎因子失去平衡有關(guān)。

3、促炎因子和抗炎因子的平衡一旦被打破，免疫細(xì)胞也可對(duì)正常菌群和食物性抗原引起免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)?；颊吣c黏膜中促炎細(xì)胞因子水平升高，抗炎細(xì)胞因子水平下降，導(dǎo)致炎癥性腸?。肆_恩病和潰瘍性結(jié)腸炎等），且升高的水平與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，長時(shí)間的免疫調(diào)節(jié)失衡促使炎癥趨于慢性化。新近觀點(diǎn)提示，促炎性和抗炎性免疫調(diào)節(jié)由細(xì)胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制所介導(dǎo)，這一發(fā)現(xiàn)為未來炎癥性腸病的治療開辟了新的途徑。腸相關(guān)淋巴樣組織由派爾集合淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)組成，腸

4、黏膜免疫細(xì)胞主要包括腸上皮細(xì)胞、M細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和固有層淋巴細(xì)胞等。炎癥性腸病(IBD)患者腸道免疫耐受機(jī)制被破壞，造成部分腸黏膜淋巴細(xì)胞增殖，導(dǎo)致大量炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，致炎癥反應(yīng)的發(fā)生，最終引發(fā)IBD相關(guān)癥狀和體征。潰瘍性結(jié)腸炎患者腸黏膜中，單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量TNF-α和IL-1β，致炎癥面積的擴(kuò)大以及炎癥遞質(zhì)、破壞性酶類、自由基分泌的增加，發(fā)展成組織損傷的急性炎癥。此外，IL-1β還可通過自分泌或旁分泌刺激其

5、他炎癥遞質(zhì)如IL-6、IL-8和TNF-α的產(chǎn)生;TNF-α則可使中性粒細(xì)胞聚集、內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子上調(diào)以及增加上皮緊密連接的通透性和抑制上皮細(xì)胞的生長等。在各種誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型實(shí)驗(yàn)中，硫酸葡聚糖鈉(DSS)誘導(dǎo)的腸炎模型是經(jīng)典模型之一，也是應(yīng)用最廣泛的小鼠結(jié)腸炎模型。本研究以經(jīng)口給藥途徑，研究駱駝奶對(duì)正常小鼠免疫細(xì)胞數(shù)量及功能的影響，并建立DSS誘導(dǎo)的急慢性腸炎模型，研究駱駝奶能否在一定程度上預(yù)防DSS誘導(dǎo)的腸炎，對(duì)DSS誘導(dǎo)的腸炎模

6、型是否也有一定的輔助治療功能。
　　研究方法:1正常小鼠模型:將雄性C57BL/6小鼠（6周齡）隨機(jī)分為2組，即灌胃雙蒸水(DDW)對(duì)照組和灌胃駱駝奶實(shí)驗(yàn)組，每組3只，連續(xù)灌胃14天。比較C57BL/6品系的正常小鼠喂食駱駝奶組和喂食雙蒸水組腸黏膜組織中免疫細(xì)胞數(shù)量及比例。2急性腸炎模型:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠分別連續(xù)14天灌胃駱駝奶和雙蒸水后，經(jīng)口給予3％DSS，自由飲用，連用5天。第5天處死小鼠。3慢性腸炎模型:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠

7、分別連續(xù)14天灌胃駱駝奶和雙蒸水后，經(jīng)口給予1.5％DSS，自由飲用，每5天間隔給DSS，不喂DSS的同時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠分別繼續(xù)灌胃駱駝奶和雙蒸水，第25天處死小鼠。4取出小鼠盲腸至肛門部全部腸管，采用大體觀察評(píng)分和蘇木精-伊紅染色法(HE)評(píng)估小鼠腸炎嚴(yán)重程度。提取腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞分析技術(shù)(FACS)胞外染色檢測(cè)小鼠腸黏膜淋巴組織中自然殺傷細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，記憶性T細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞，中性粒細(xì)胞

8、的細(xì)胞數(shù)量并計(jì)算各自在腸道免疫細(xì)胞中所占比例。流式細(xì)胞分析技術(shù)胞內(nèi)染色檢測(cè)腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中IL-10，IL-17A，IFN-γ等細(xì)胞因子的產(chǎn)生。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-17A、IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-6、IL-1β、IL-23和TNF-α的水平。
　　結(jié)果:1.正常小鼠模型中，通過流式細(xì)胞分析技術(shù)證明，在小鼠腸道黏膜固有層淋巴細(xì)胞中實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組CD4+T細(xì)胞比例

9、和細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均增高，產(chǎn)生IFN-γ的CD4+T細(xì)胞比例和細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均增高(P＜0.05)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組IFN-γ分泌量增加，IL-4分泌量降低(P＜0.05)。2.在DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型中，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組中產(chǎn)生IFN-γ的CD4+CD44+T細(xì)胞比例增加，產(chǎn)生IL-17的CD4+CD44+T細(xì)胞比例和細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均降低(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組IFN-γ分泌量增加，IL-4和IL-17分泌量均降低

10、(P＜0.05)。3.DSS誘導(dǎo)的小鼠慢性腸炎模型中，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組中產(chǎn)生IFN-γ的CD4+CD44+T細(xì)胞比例和細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均下降(P＜0.05)，IFN-γ的分泌量降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1、駱駝奶對(duì)正常小鼠具有腸道粘膜免疫功能調(diào)節(jié)作用。駱駝奶可以促進(jìn)CD4+T-LPL細(xì)胞增殖和IFN-γ產(chǎn)生。2、駱駝奶對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型具有炎癥緩解作用。其機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞分化、促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子分