血管緊張素Ⅱ?qū)π律笫笮募〖毎麅?nèi)脂素表達的影響.pdf

1、目的:傳統(tǒng)觀念認為脂肪組織是一種儲存能量的器官。近年來,脂肪組織作為一個內(nèi)分泌器官己成為學(xué)術(shù)界的共識,分泌眾多脂肪細胞因子,包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、血纖維蛋白溶酶原激活抑制劑(PAI-1)、瘦素(leptin)、脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resistin)、內(nèi)脂素(visfatin)等。脂肪細胞因子在維持正常機體的能量代謝、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞功能

2、、應(yīng)激等多方面具有重要影響。肥胖時隨著脂肪的堆積以及脂肪細胞體積的增大,脂肪細胞因子分泌失調(diào),最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、代謝綜合征等一系列肥胖相關(guān)性疾病。
　　 Fukuhara等[1]利用差異顯示的方法對人體皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪PCR的產(chǎn)物進行篩選,發(fā)現(xiàn)了一個在內(nèi)臟脂肪特異性高表達的mRNA。測序結(jié)果表明該cDNA片段與前B細胞克隆增強因子(Pre-B-coloning enhancefactor,PBEF)基因的5

3、'端非編碼區(qū)序列完全相同,因此內(nèi)脂素又被稱為PBEF。內(nèi)脂素作為一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子,其主要來源于內(nèi)臟脂肪組織,具有擬胰島素活性,可降低血糖。循環(huán)中的內(nèi)脂素不僅僅與血漿中炎性標記物的水平相關(guān)[2],還具有其他多種生物學(xué)功能,可能與血管損傷、內(nèi)皮功能紊亂相關(guān)[3-4]。內(nèi)脂素可能直接促進血管炎癥,在慢性炎癥的背景下,成為聯(lián)系代謝紊亂與包括動脈粥樣硬化和冠狀動脈粥樣硬化性疾病等動脈粥樣硬化血栓形成疾病的橋梁。
　　 內(nèi)脂素主要在

4、內(nèi)臟脂肪細胞產(chǎn)生。同時,在骨骼肌、肝臟、骨髓基質(zhì)細胞、淋巴細胞中均有表達[5]。而心肌細胞是否表達內(nèi)脂素,血管緊張素Ⅱ刺激對心肌細胞內(nèi)脂素表達起了什么作用尚無相關(guān)報道。本研究通過觀察不同濃度的血管緊張素Ⅱ、不同作用時間對體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞內(nèi)脂素表達的影響,探討血管緊張素Ⅱ刺激下心肌細胞內(nèi)脂素的表達,為了心血管疾病的發(fā)病機制增加了新內(nèi)容、新思路,為臨床防治提供一個新的靶點。
　　 方法:無菌試驗條件下不分性別的提取新生2-

5、3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌細胞進行原代培養(yǎng),48小時含血清培養(yǎng),24小時撤血清培養(yǎng)之后,選取生長狀態(tài)好的細胞隨機分為10組。不同濃度血管緊張素Ⅱ五組:①血管緊張素Ⅱ10-8mol/L組、②血管緊張素Ⅱ10-7mol/L組、③血管緊張素Ⅱ10-6mol/L組、④血管緊張素Ⅱ10-5mol/L組、⑤對照組。不同作用時間五組①6h組、②12h組、③24h組、④48h組、⑤對照組。以不同濃度的血管緊張素Ⅱ干預(yù)48小時及血

6、管緊張素Ⅱ(10-6mol/L)作用不同時間后,以GAPDH為內(nèi)對照,應(yīng)用RT-PCR和western-blot技術(shù)檢測心肌細胞中內(nèi)脂素mRNA和蛋白的表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外成功培養(yǎng)SD大鼠心肌細胞。
　　 2.隨血管緊張素Ⅱ濃度增加,心肌細胞活力增加,并且在濃度為10-6mol/L時達到最大,隨血管緊張素Ⅱ濃度進一步增加,心肌細胞活力下降。
　　 3.隨血管緊張素Ⅱ濃度增加,大鼠心肌細

7、胞Visfatin-mRNA及蛋白的表達明顯增加。
　　 4.血管緊張素Ⅱ刺激下的心肌細胞活力呈時間依賴性,12小時達高峰,24小時后心肌細胞活力下降。
　　 5.心肌細胞在血管緊張素Ⅱ作用24h內(nèi),內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達隨作用時間的延長而明顯增加;作用48h,內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達相對于作用24h時下降。
　　 結(jié)論:心肌細胞可以表達內(nèi)脂素。血管緊張素Ⅱ可促進體外培養(yǎng)的心肌細胞內(nèi)脂素的表達水平的增加。隨