體外重建毛乳頭的方法探索及其生物學(xué)特性的初步實驗研究.pdf

1、目的：利用分離的毛乳頭(dermal papilla)經(jīng)過消化傳代后，與適宜的支架材料混合培養(yǎng)，比較不同培養(yǎng)條件下細(xì)胞的生長方式和增殖能力的差異，探討人工重建毛乳頭的新途徑，以及評估其在體內(nèi)、體外條件下誘導(dǎo)毛囊分化的能力。 方法：利用酶消化法分別培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞(dermal papilla cells)，成纖維細(xì)胞，包皮表皮干細(xì)胞(foreskin epidermal stem cell)。比較微膠囊與微載體培養(yǎng)細(xì)胞的差異，選

2、取微載體cytodex-3和cultispher-G培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞，對比不同培養(yǎng)方式間毛乳頭細(xì)胞生長曲線，倍增時間的差異。甲苯胺藍(lán)染色，α-肌動蛋白染色鑒定毛乳頭細(xì)胞。將毛乳頭細(xì)胞、微載體毛乳頭系統(tǒng)分別與包皮來源的表皮干細(xì)胞混合在復(fù)方殼多糖凝膠中進(jìn)行培養(yǎng)，比較對表皮干細(xì)胞分化的影響；同時將上述系統(tǒng)移植入裸鼠體內(nèi)培養(yǎng)。定期觀察大體情況。培養(yǎng)4 w、8 w后，行病理切片、免疫組化觀察體內(nèi)、體外毛囊形成情況。 結(jié)果：傳統(tǒng)單層培養(yǎng)與微載

3、體培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞對其生長周期影響不大，只是消化時間和倍增時間延后。選取微載體cytodex-3和cultispher-G培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞，在12天后可達(dá)到最大細(xì)胞量，微載體內(nèi)外長滿毛乳頭細(xì)胞，載體間細(xì)胞聚集成團(tuán)。微載體毛乳頭系統(tǒng)與復(fù)方殼多糖人工皮膚體外培養(yǎng)模型培養(yǎng)1月后沒有發(fā)現(xiàn)形成細(xì)胞團(tuán)狀結(jié)構(gòu)。微載體毛乳頭系統(tǒng)與包皮表皮干細(xì)胞混合移植于裸鼠真皮、腹膜外，于4 w、8 w后都能形成毛囊樣結(jié)構(gòu)。H.E.染色可見毛囊樣結(jié)構(gòu)，中間有均勻紅染層狀角