解脲脲原體對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因的表型及定位研究.pdf

1、解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，Uu)是支原體科、脲原體屬中主要微生物之一，可分為2個群(Parvo和T960生物群)和14個血清型(1～14血清型)。大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物是治療Uu感染一線藥物之一，在孕婦、兒童患者中，大環(huán)內(nèi)酯類更是唯一可選用的藥物。近年來國內(nèi)外報道Uu對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥形勢十分嚴(yán)峻，但相關(guān)的耐藥機(jī)制至今尚未明確。我們經(jīng)過初步研究，發(fā)現(xiàn)耐紅霉素的Uu臨床株存在介導(dǎo)對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的ermB、msr

2、A/B基因，但是否存在其它的耐藥機(jī)制尚未清楚，耐藥表型與耐藥機(jī)制的關(guān)系、以及耐藥基因在Uu中的定位也未見文獻(xiàn)報道。 研究目的： 測定Uu臨床株對紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素及克林霉素標(biāo)準(zhǔn)品的體外最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)，PCR檢測Uu菌株的ermB、msrA、msrB、msrC、msrD、ereA和ereB耐藥基因及轉(zhuǎn)座子遺傳標(biāo)記int—Tn基因，探討耐藥基因

3、與耐藥表型的關(guān)系及耐藥基因在Uu中的可能定位，以全面、深入的認(rèn)識Uu對大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥機(jī)制及其相關(guān)的分子基礎(chǔ)。 研究方法: 1.Uu菌株：收集我院皮膚性病科2008年3～5月份非淋菌性尿道炎/粘液膿性宮頸炎患者的尿道/宮頸拭子分離的Uu菌株72株。以Uu標(biāo)準(zhǔn)株3(ATCC27815)、8(ATCC21618)血清型作實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)對照。 2.體外藥物敏感試驗(yàn)：用微量肉湯稀釋法測定Uu對紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素、克林

4、霉素標(biāo)準(zhǔn)品的體外MIC。 3.耐藥基因檢測及耐藥基因與耐藥表型關(guān)系分析：應(yīng)用PCR法檢測ermB、msrA、msrB、msrC、msrD、ereA和ereB耐藥基因，研究Uu耐藥基因與耐藥程度、耐藥表型的關(guān)系。 4.int—Tn基因的檢測及其與耐藥基因關(guān)系分析：PCR法檢測各Uu臨床株菌株是否存在轉(zhuǎn)座子遺傳標(biāo)記int—Tn基因，研究Uu轉(zhuǎn)座子與耐藥基因的關(guān)系。 5.Uu菌株生物分群：以Uu的多條帶抗原基因(MB—

5、Ag基因)為靶穿列設(shè)計(jì)引物，將Uu分為Parvo和T960兩個生物群，研究兩生物群之間在耐藥性、耐藥基因及轉(zhuǎn)座子攜帶率方面的差別。 研究結(jié)果： 1.72株Uu臨床菌株經(jīng)培養(yǎng)鑒定均符合Uu生物學(xué)特征。其中，Parvo生物群51株(51/72，70.83％)，T960生物群21株(21/72，29.17％)。 2.72株Uu臨床菌株對紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素和克林霉素的MIC范圍均為<0.125～≥128μg/ml

6、；MIC50分別為32、4、4和8μg/ml；MIC90均為≥128μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)株3、8血清型對四種抗菌藥物的MIC均≤2μg/ml。 3.72株Uu臨床株中，檢測到ermB、msrA、msrB和msrD基因的菌株分別為21、1、12和24株，檢測到同時攜帶兩種或三種耐藥基因的菌株為l3株。沒有菌株檢測到msrC、ereA或ereB基因。ermB基因陽性的菌株對紅霉素和克林霉素的MIC范圍為≥4μg/ml和≥0.5μg/ml

7、，對阿奇霉素、交沙霉素的MIC范圍均為≤0.125～≥128μg/ml(M或ML表型)。msr基因陽性菌株對紅霉素的MIC范圍為≥4μg/ml，對其它三種大環(huán)內(nèi)酯類藥物的MIC范圍均為≤0.125～≥128μg/ml(M或MS表型)。 4.72株Uu臨床株中，21株Uu檢測到int—Tn基因。僅ermB基因與int—Tn基因在相關(guān)性方面存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.兩生物群對四種抗菌藥物的MIC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

8、P>0.05)。31株msr基因陽性Uu中，Parvo和T960生物群分別21和10株；21株ermB陽性菌株中，Parvo和T960生物群分別占16和5株；l3株攜帶多種耐藥基因的Uu中，Parvo和T960生物群分別占8和5株。僅msrB基因主要分布于T960生物群(P<0.05)。 研究結(jié)論： 1.Uu臨床株存在介導(dǎo)對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥的msr基因(包括msrA、msrB和msrD基因)和ermB基因，未發(fā)現(xiàn)msr

9、C、ereA、ereB耐藥基因。同一菌株可同時存在多種耐藥基因。 2.msrB、msrD基因介導(dǎo)M或MS耐藥表型，而ermB基因介導(dǎo)M或ML耐藥表型。 3.Uu可攜帶轉(zhuǎn)座子。ermB基因可能定位Uu的轉(zhuǎn)座子內(nèi)。 4.兩生物群對紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素及克林霉素的敏感性均無顯著差異。兩種生物群均存在msr及ermB耐藥基因，僅msrB基因主要存在于T960生物群，而其它耐藥基因在兩生物群之間分布差異無顯著學(xué)意義。