胚胎大鼠神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)鑒定及誘導(dǎo)其分化為類毛細(xì)胞的研究.pdf

1、第一部分、無(wú)血清培養(yǎng)條件下神經(jīng)干細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化的研究。 目的：探討體外無(wú)血清條件下培養(yǎng)胚鼠神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs),觀察其生長(zhǎng)及分化情況. 方法：取孕16-18天SD系大鼠的胚胎海馬組織,在含EGF,bFGF,B27的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng),電子顯微鏡下觀察其增殖分化過(guò)程,并通過(guò)免疫熒光方法鑒定分化后的細(xì)胞類型. 結(jié)果：NSCs在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)旺盛,8天左右就可以形成胞體透亮、折光性好的干細(xì)胞球,分化后

2、的細(xì)胞顯示NSE,GFAP免疫陽(yáng)性. 結(jié)論：無(wú)血清培養(yǎng)條件下NSCs生長(zhǎng)良好,在含血清的培養(yǎng)基中可以分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞. 第二部分、神經(jīng)干細(xì)胞與體外培養(yǎng)的乳鼠基底膜上清液共培養(yǎng)分化為類毛細(xì)胞的研究。 目的: 探討體外誘導(dǎo)胚胎大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)分化為類毛細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究。 方法: 從SD系胚鼠大腦分離NSCs,在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)后將其放到含鼠尾膠原包被的蓋

3、玻片的6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),然后將乳鼠基底膜取出體外培養(yǎng)后汲取其上清液與NSCs一起培養(yǎng),14-21天后通過(guò)免疫熒光和免疫組化法檢測(cè)毛細(xì)胞標(biāo)志物myosin VIIa和calretinin，并計(jì)算分化比例。 結(jié)果: NSCs分化后的細(xì)胞約有15.4％呈myosin VIIa免疫熒光陽(yáng)性，21.7％呈免疫組化calretinin陽(yáng)性。 結(jié)論: 體外培養(yǎng)的乳鼠基底膜上清液能誘導(dǎo)NSCs分化為類毛細(xì)胞。 第三部分、神經(jīng)干細(xì)

4、胞與乳鼠基底膜共培養(yǎng)后分化為類毛細(xì)胞的研究。 目的: 探討體外誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)分化為類毛細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究。 方法: 從SD系胚鼠大腦分離NSCs,在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。取出生3天內(nèi)乳鼠基底膜與NSCs一起培養(yǎng),14-21天后通過(guò)免疫熒光和免疫組化法檢測(cè)毛細(xì)胞標(biāo)志物myosin VIIa和calretinin，并計(jì)算分化比例。 結(jié)果: NSCs分化后的細(xì)胞約有17.1％呈