毒素清對(duì)肺炎克雷白桿菌肺炎老齡大鼠多器官損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：老年肺炎是老年人常見(jiàn)的感染性疾病，容易引發(fā)老年多器官損傷，是導(dǎo)致老年人多器官功能障礙綜合征和多器官功能衰竭的主要疾病，也是老年人死亡的主要原因之一。因此，本課題以老齡大鼠為研究對(duì)象，研究克雷白桿菌肺炎多器官損傷模型大鼠細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的變化，以探討其病理生理學(xué)機(jī)制，揭示毒素清對(duì)肺炎所致多器官損傷保護(hù)作用的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：SD青年大鼠(5～6月齡)28只，老齡大鼠(20～22月齡)56只，均為清潔級(jí)，雄性

2、。按體重隨機(jī)分組，青年大鼠分為對(duì)照組和模型組，每組各14只，造模前1天及造模始灌胃生理鹽水，每日1次，造模第6天取材。老齡大鼠分為對(duì)照組、模型組、左氟沙星組、毒素清組，每組各14只。對(duì)照組和模型組處理同青年大鼠；左氟沙星組、毒素清組，造模前1天及造模始灌胃，給藥劑量按動(dòng)物體型系數(shù)比率換算劑量(左氟沙星22.19mg·kg<'-1>·d<'-1>、毒素清3.99g·kg<'-1>·d<'-1>)。肺炎引起多器官損傷模型采用氣管插管法復(fù)制，

3、造模第6天取材。測(cè)定外周血和肺泡灌洗液中WBC和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)；測(cè)定血清生物化學(xué)指標(biāo)、IL-1和TNF-α：光鏡下觀察肺、心、肝、腎和小腸組織病理形態(tài)學(xué)改變；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肺臟中IL-1、TNF-α和MIP-2的表達(dá)水平；采用原位雜交技術(shù)檢測(cè)肺臟MIP-2mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果： 1 白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)：青年和老齡模型組2d、6d外周血白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞及6d肺泡灌洗液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分別高于青年和老

4、齡對(duì)照組(P<0.01)；毒素清組和左氟沙星組2d、6d外周血白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞及6d肺泡灌洗液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分別低于老齡模型組(P<0.01)；老齡對(duì)照組外周血及肺泡灌洗液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞較青年對(duì)照組降低(P<0.05)。與2d相比，青年和老齡模型組6d外周血白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)分別高于青年和老齡模型組(P<0.01)；毒素清組和左氟沙星組6d外周血白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)低于老齡模型組(P<0.01)。 2肺組織勻

5、漿的細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)：青年和老齡模型組菌落計(jì)數(shù)分別高于青年和老齡對(duì)照組(P<0.01)；老齡模型組菌落計(jì)數(shù)高于青年模型組(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組菌落計(jì)數(shù)明顯低于老齡模型組(P<0.01)。 3 血清生物化學(xué)指標(biāo)(ALT、AST、BUN、CR和LDH)：青年和老齡模型組血清生物化學(xué)指標(biāo)分別高于青年和老齡對(duì)照組(P<0.01)；老齡模型組較青年模型組升高更為明顯(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組較老齡模型組顯著降低(P<0

6、.01)。 4 肺、心、小腸組織含水量：青年和老齡模型組分別高于青年和老齡對(duì)照組(P<0.01)，老齡對(duì)照組則低于青年對(duì)照組(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組則低于老齡模型組(P<0.01)。 5 各組織病理改變及損傷分級(jí)比較5.1 各組織普通病理形態(tài)學(xué)觀察①肺臟：青年對(duì)照組為正常肺組織，老齡對(duì)照組肺組織可見(jiàn)肺泡上皮有退行性改變；青年模型組肺組織可見(jiàn)充血、水腫；老齡模型組肺肺泡上皮有退行性改變，見(jiàn)有纖維增生，有少部分被破壞，各

7、級(jí)支氣管慢性炎癥明顯，其充血、水腫較青年模型組嚴(yán)重。與老齡模型組比較，毒素清和左氟沙星組病理?yè)p傷改善明顯。②心臟：青年對(duì)照組為正常心肌組織；老齡對(duì)照組心肌組織基本正常，可見(jiàn)心肌纖維排列不整齊；青年和老齡模型組心肌纖維排列紊亂，間質(zhì)毛細(xì)血管及血管擴(kuò)張及充血，偶見(jiàn)壞死，而以老齡模型組更為嚴(yán)重。毒素清和左氟沙星組多數(shù)心肌纖維接近正常，部分間質(zhì)中毛細(xì)血管有輕度擴(kuò)張充血。③肝臟：青年和老齡對(duì)照組可見(jiàn)正常的肝細(xì)胞組織；青年和老齡模型組肝細(xì)胞可見(jiàn)點(diǎn)狀

8、壞死，出現(xiàn)不同程度的淤血，肝細(xì)胞出現(xiàn)濁腫變性，而且老齡模型組較青年模型組嚴(yán)重。毒素清組和左氟沙星組肝組織的淤血有所減輕，肝細(xì)胞變性得到一定改善，壞死消失。④腎臟：青年和老齡對(duì)照組為正常的腎臟組織；青年和老齡模型組可見(jiàn)腎間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、腎小管上皮細(xì)胞變性和蛋自滲出，老齡模型組更為嚴(yán)重。毒素清組和左氟沙星組的上述病理改變均得到改善。⑤小腸：青年和老齡對(duì)照組可見(jiàn)正常的小腸組織；老齡模型組小腸組織大部分被破壞，其病變累及黏膜下層：黏膜多處

9、脫落，黏膜下層、肌層、漿膜層均被大量的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿膜細(xì)胞浸潤(rùn)，病理改變較青年模型組嚴(yán)重。毒素清組和左氟沙星組與老齡模型組比較均有明顯改善。 肺臟電鏡下觀察：青年對(duì)照組氣管、支氣管粘膜上皮細(xì)胞纖毛排列整齊、無(wú)脫落，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞無(wú)變性；老齡對(duì)照組細(xì)支氣管上皮細(xì)胞部分退化變性；青年模型組和老齡模型組氣管上皮細(xì)胞表面局部微絨毛脫落，氣管、支氣管上皮纖毛粘連、倒伏，纖毛脫落明顯，線粒體部分嵴和膜溶合消失，嗜鋨性板層小體大部

10、分排空，肺泡腔內(nèi)有單核巨噬細(xì)胞。細(xì)支氣管上皮細(xì)胞表面纖毛變細(xì)，排列稀疏。細(xì)支氣管、呼吸細(xì)支氣管上皮細(xì)胞之間間隙增寬，上皮細(xì)胞輕度變性，杯狀細(xì)胞分泌明顯增加。胞質(zhì)內(nèi)的微絲明顯排列成束狀。上皮細(xì)胞間隙明顯增寬，細(xì)胞核染色質(zhì)明顯邊集，而以老齡模型組纖毛脫落、上皮細(xì)胞變性更為明顯。毒素清和左氟沙星組可見(jiàn)氣管上皮細(xì)胞表面局部微絨毛脫落減少，氣管、支氣管上皮纖毛粘連、倒伏，纖毛脫落明顯明顯改善，偶見(jiàn)線粒體部分嵴和膜溶合消失，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞和單核

11、巨噬細(xì)胞。 5.2 各臟器損傷病理分級(jí)比較：青年和老齡模型組分別較對(duì)青年和老齡對(duì)照組損傷嚴(yán)重(P<0.01)；老年模型組較青年模型組更為嚴(yán)重(P<0.01)；毒素清和左氟沙星組損傷程度較老齡模型組明顯減輕(P<0.01)。 6 各組大鼠細(xì)胞因子的改變： 6.1血清IL-1和TNF-a水平的變化：青年和老齡模型組IL-1和TNF-a分別高于青年和老齡對(duì)照組(P<0.05，P<0.01)；老齡模型組IL-1和TNF-

12、a高于青年模型組(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組IL-1和TNF-a則低于老齡模型組(P<0.05，P<0.01)。 6.2肺組織IL-1、TNF-a和MIP-2表達(dá)的變化：青年和老齡模型組IL-1、TNF-α和MIP-2的表達(dá)分別較青年和老齡對(duì)照組顯著(P<0.01)；老年模型組IL-1、TNF-α和MIP-2較青年模型組更為顯著(P<0.05)；毒素清和左氟沙星組IL-1、TNF-α和MIP-2的表達(dá)低于老齡模型組(P<

13、0.01)。 7肺組織MIP-2 mRNA的表達(dá)：青年和老齡模型組MIP-2 mRNA的表達(dá)分別較青年和老齡對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P<0.01)；老齡模型組較青年模型組MIP-2 mRNA的表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；毒素清組和左氟沙星組MIP-2 mRNA的表達(dá)較老齡模型組表達(dá)顯著減低(P<0.01)。 結(jié)論： 1 肺炎可引起多器官損傷，而老年肺炎所引發(fā)的多器官損傷較青年更為嚴(yán)重，其病理變化可能與增齡因素有關(guān)。