鉛對HL-7702細胞的損傷作用.pdf

1、目的：研究鉛對肝細胞的損傷作用，并從氧化損傷、細胞凋亡等途徑初步探討其可能的發(fā)生機制。 方法：取培養(yǎng)的人肝細胞株HL-7702細胞，分別以50、100、200和400μmol/L的醋酸鉛溶液處理24h，作量效分析；100μmol/L劑量組再分別培養(yǎng)6、12、24和48h，作時效分析，以等體積D-Hank's液作對照。各組培養(yǎng)至相應時間后，均進行如下檢測：①采用HE染色和透射電鏡，觀察肝細胞形態(tài)和超微結構改變。②以羥胺法測定超氧化

2、物歧化酶活性，以分光光度法測定谷胱甘肽過氧化物酶活性，觀察肝細胞抗氧化能力的改變；以分光光度法法檢測乳酸脫氫酶活性，觀察細胞膜損傷情況。③應用碘化丙啶染色結合流式細胞儀檢測各周期細胞比例和細胞凋亡率。④用免疫細胞化學法檢測肝細胞內P53的表達。 結果：① HE染色顯示：隨著鉛劑量的增加，細胞體積逐漸縮小、細胞皺縮，胞漿和胞核空泡變增多，核膜增厚，細胞核出現染色質嗜堿性增強且出現邊集，核固縮甚至碎裂崩解。隨著鉛作用時間的延長，細胞

3、大小和密度未見明顯影響，但胞漿和胞核空泡變增多，染色質濃聚邊集。②電鏡觀察：50μmol/L組極少數細胞有局灶胞膜破裂，部分線粒體嵴消失呈空泡變；400μmol/L組絕大多數細胞都有不同程度的變性，胞膜不完整，甚至有少數細胞呈裸核狀，線粒體損傷嚴重。③生化檢測顯示：細胞上清液中SOD活力和GSH-Px活力呈劑量和時間依賴性降低，而LDH活力呈劑量和時間依賴性升高。④流式細胞術檢測發(fā)現：隨著鉛劑量的增大和作用時間的延長，細胞凋亡率逐漸增加

4、。細胞周期分析結果顯示：50μmol/L組和400μmol/L組各周期細胞比例與對照比較沒有明顯改變；100μmol/L組G2/M期細胞比例減少，S期細胞比例增加；200μmol/L組S期細胞比例減小，G1期細胞比例增加。6h組和48h組各周期細胞比例與對照比較沒有明顯差異；12h組G1期和S期細胞比例減少，G2/M期細胞比例增加；24h組G2/M期細胞比例減少，S期細胞比例增加。⑤ P53免疫細胞化學染色顯示：隨著鉛劑量的增加和作用時