紫杉醇對(duì)人甲狀腺未分化癌細(xì)胞體外作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文旨在觀察不同濃度的紫杉醇對(duì)人甲狀腺未分化癌細(xì)胞：DRO生長(zhǎng)的影響。研究紫杉醇能否阻滯細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過測(cè)定VEGF、bcl-2及bax在紫杉醇作用前后的變化，探討紫杉醇治療甲狀腺未分化癌的可能的分子機(jī)制。 方法： 1．細(xì)胞培養(yǎng)人甲狀腺未分化癌DRO細(xì)胞株，培養(yǎng)于含有10％胎牛血清，1×10<'5>U/L青霉素和鏈霉素、0.1 mmol/L MEM非必需氧基酸、1 mmol/L丙酮酸鈉的培養(yǎng)基中，置37℃、5

2、％CO<,2>培養(yǎng)箱培養(yǎng)，2～3天換液1次。用0.25％胰酶常規(guī)消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 2．細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)采用MTT法，檢測(cè)經(jīng)不同濃度的紫杉醇溶液(濃度分別為0、6.25、12.5、25、50、100μg/L，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，0μg/L紫杉醇為對(duì)照組)，分別培養(yǎng)24、48、72小時(shí)，在酶標(biāo)儀492 nm波長(zhǎng)處讀取吸光度A值。存活率(％)=實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值×100％，抑制率(％)=(1-存活率)×100％

3、。作圖法得出半數(shù)抑制濃度：IC<,50>。 3．細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的測(cè)定采用流式細(xì)胞儀技術(shù)，0μg/L(對(duì)照組)，6.25μg/L(實(shí)驗(yàn)組)紫杉醇分別作用DRO細(xì)胞24、48、72小時(shí)，在FACSCalibur雙激光流式細(xì)胞儀上檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的變化。 4．采用RT-PCR方法測(cè)定經(jīng)0μg/L(對(duì)照組)、6.25μg/L(實(shí)驗(yàn)組)紫杉醇作用48小時(shí)后DRO細(xì)胞VEGF mRNA、bcl-2mRNA及baxmRNA表達(dá)的

4、變化。 結(jié)果： 1．紫杉醇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。不同濃度紫杉醇與DRO細(xì)胞共同培養(yǎng)后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，并呈劑量、時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，72小時(shí)的IC<,50>為10μg/L。 2．紫杉醇對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)組紫杉醇作用于DRO細(xì)胞可將細(xì)胞周期阻滯于G<,2>/M期，與對(duì)照組比較24小時(shí)即可檢測(cè)到明顯的G<,2>/M期阻滯，48、72小時(shí)后紫杉醇G<,2>/M期阻滯作用逐漸減退；紫杉醇能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，G<,2>

5、/M期阻滯作用后，流式細(xì)胞儀可檢測(cè)到明顯的凋亡峰，48小時(shí)凋亡達(dá)高峰，凋亡率為32.76％±1.54％，以后漸降低。 3．VEGF mRNA、bcl-2 mRNA及bax mRNA的表達(dá)變化VEGF mRNA在紫杉醇作用后表達(dá)減低，bax mRNA在紫杉醇作用后表達(dá)增強(qiáng)，而bcl-2 mRNA在作用前后表達(dá)無明顯變化。 結(jié)論： 1．紫杉醇在體外具有抑制人甲狀腺未分化癌DRO細(xì)胞增殖的作用，這種作用與劑量、時(shí)間呈正